Publicação
Transformação Natural em Arcobacter butzleri
| Resumo: | Arcobacter butzleri é, dentro do género Arcobacter, a espécie mais frequentemente associada a quadros diarreicos em humanos, bem como a alguns casos de bacteriemias. A. butzleri demonstra uma elevada diversidade genética, o que poderá contribuir para o aumento da sua capacidade adaptativa aos diferentes ambientes onde pode ser encontrado. Um dos mecanismos que contribui para a diversidade genética, poderá ser a transferência horizontal de genes, através do processo de transformação natural, que é caracterizado pela absorção, incorporação e expressão funcional de DNA exógeno, e que pode ocorrer em condições normais de crescimento. Assim, de modo a esclarecer se A. butzleri é naturalmente competente para transformação e quais os fatores que influenciam este processo, foram testados diferentes protocolos de transformação, com a utilização de DNA exógeno e isogénico contendo marcas de resistência a antibióticos. Foi possível verificar neste trabalho que quatro das cinco estirpes de A. butzleri estudadas foram naturalmente transformáveis, com uma frequência de transformação máxima obtida de 10-5 transformantes por célula recetora, obtida após 5 dias de incubação. Confirmou-se ainda que a competência se mantém desde a fase exponencial à fase estacionária de crescimento, e as melhores condições de transformação demonstraram ser a utilização de 1 μg de DNA isogénico, com incubação a 30°C e sob uma atmosfera de microaerofilia. A. butzleri também demonstrou favorecer a incorporação de material genético da sua estirpe/espécie. Observou-se ainda que o processo de incorporação de gDNA ocorre logo após a sua adição. Finalmente, verificou-se que A. butzleri tem a capacidade de trocar material genético em coculturas. Em suma, a transferência horizontal de genes mediada por transformação natural é provavelmente um dos processos que contribui para a diversidade genética em A. butzleri, sendo que esta ferramenta pode ser usada para estudos genéticos desta espécie. |
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| Autores principais: | Bonifácio, Marina Alexandra Carriço |
| Assunto: | Arcobacter butzleri transformação natural transferência horizontal de genes |
| Ano: | 2018 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade Nova de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório Institucional da UNL |
| Resumo: | Arcobacter butzleri é, dentro do género Arcobacter, a espécie mais frequentemente associada a quadros diarreicos em humanos, bem como a alguns casos de bacteriemias. A. butzleri demonstra uma elevada diversidade genética, o que poderá contribuir para o aumento da sua capacidade adaptativa aos diferentes ambientes onde pode ser encontrado. Um dos mecanismos que contribui para a diversidade genética, poderá ser a transferência horizontal de genes, através do processo de transformação natural, que é caracterizado pela absorção, incorporação e expressão funcional de DNA exógeno, e que pode ocorrer em condições normais de crescimento. Assim, de modo a esclarecer se A. butzleri é naturalmente competente para transformação e quais os fatores que influenciam este processo, foram testados diferentes protocolos de transformação, com a utilização de DNA exógeno e isogénico contendo marcas de resistência a antibióticos. Foi possível verificar neste trabalho que quatro das cinco estirpes de A. butzleri estudadas foram naturalmente transformáveis, com uma frequência de transformação máxima obtida de 10-5 transformantes por célula recetora, obtida após 5 dias de incubação. Confirmou-se ainda que a competência se mantém desde a fase exponencial à fase estacionária de crescimento, e as melhores condições de transformação demonstraram ser a utilização de 1 μg de DNA isogénico, com incubação a 30°C e sob uma atmosfera de microaerofilia. A. butzleri também demonstrou favorecer a incorporação de material genético da sua estirpe/espécie. Observou-se ainda que o processo de incorporação de gDNA ocorre logo após a sua adição. Finalmente, verificou-se que A. butzleri tem a capacidade de trocar material genético em coculturas. Em suma, a transferência horizontal de genes mediada por transformação natural é provavelmente um dos processos que contribui para a diversidade genética em A. butzleri, sendo que esta ferramenta pode ser usada para estudos genéticos desta espécie. |
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