Publicação
Characterisation of Plasmodium falciparum antigens for the development of serological assay or vaccine candidates for malaria
| Resumo: | A malária causada por Plasmodium falciparum continua a ser um grande problema de saúde nas regiões tropicais e subtropicais em todo o mundo. Várias proteínas do parasita expressas durante o ciclo replicativo no hospedeiro vertebrado, foram descritas nos últimos anos e estão sendo consideradas como potenciais candidatos à vacina anti-malária; no entanto ainda existem algumas proteínas que não foram identificadas como potenciais alvos de diagnostico, terapêuticos e/ou candidatos a vacina. Este estudo retrospetivo descreve a identificação e caracterização de antigénios imunogénicos de P. falciparum como possíveis candidatos para o desenvolvimento de novos testes serológicos ou candidatos a vacina para malaria. Os métodos: Um extrato total de P. falciparum (PfET) do clone 3D7, foi selecionado como o nosso alvo de estudo. A antigenicidade do PfET foi avaliada usando soro humano de indivíduos anteriormente expostos à malária. Foram analisadas 436 amostras de soro, das quais 419 soros de indivíduos, com história clínica de malária, oriundos de alguns países de Africa, América e Asia, previamente diagnosticados na Unidade de Clínica Tropical do IHMT no 2012; e 17 soros de indivíduos sem história clínica de malária foram usados como controle negativo. Foram determinados anticorpos Totais, IgM, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 anti-P. falciparum por ELISA. Foi feita a caracterização imunoquímica de antigénios de P. falciparum responsáveis por tais reatividades serológicas por immunoblotting. Foi efetuada uma análise in silico de frações proteicas de P. falciparum previamente identificadas por espectrometria de massa. Resultados: Anticorpos anti-P. falciparum reconheceram os antigénios do PfET, com maior contribuição de anticorpos tipo IgG (72%), IgG1 (43%) e IgG3 (64%). O immunoblotting revelou frações proteicas de P. falciparum com massa molecular entre 20 -190 kDa, das quais bandas com massa molecular de 25, 35, 40, 45, 75, 80, 100 e 150 kDa apresentaram maior reatividade antigénica. A análise in silico identificou 29 epitopes correspondentes a seis proteínas de P. falciparum previamente identificadas: Elongation factor 1 alpha; Protein disulphide isomerase (PDI), Phosphoglycerate kinase; Glucose regulated protein homologue; Rhoptry associated protein 2 (RAP-2); Rhoptry-associated protein 3 (RAP-3); a análise in silico sugere que RAP-2, RAP-3, PDI, apresentam características imunogénicas essenciais como epitopes consensos, signal peptidica, domínio transmembrana. Conclusão: Este estudo mostra a caracterização de antigénios do PfET, tendo em conta que algumas das suas proteínas apresentaram várias características imunogénicas importantes, como aqui se mostra, estas proteínas podem ser consideradas como um bom candidato à vacina. São assim recomendados estudos complementares destinados a avaliar a sua capacidade de imunogenicidade e indução de proteção contra a malaria. Futuramente espera-se potencializar a ação destas proteínas e contribuir na caracterização de potenciais novos alvos antigénicos de P. falciparum importantes para o diagnóstico sorológico ou candidatos a vacina para malaria. |
|---|---|
| Autores principais: | MORENO, Yorleydy Ruiz |
| Assunto: | Ciências biomédicas Biologia molecular Doenças tropicais Malária Plasmodium falciparum Antigénio Vacina |
| Ano: | 2020 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | tese de doutoramento |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade Nova de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório Institucional da UNL |
| Resumo: | A malária causada por Plasmodium falciparum continua a ser um grande problema de saúde nas regiões tropicais e subtropicais em todo o mundo. Várias proteínas do parasita expressas durante o ciclo replicativo no hospedeiro vertebrado, foram descritas nos últimos anos e estão sendo consideradas como potenciais candidatos à vacina anti-malária; no entanto ainda existem algumas proteínas que não foram identificadas como potenciais alvos de diagnostico, terapêuticos e/ou candidatos a vacina. Este estudo retrospetivo descreve a identificação e caracterização de antigénios imunogénicos de P. falciparum como possíveis candidatos para o desenvolvimento de novos testes serológicos ou candidatos a vacina para malaria. Os métodos: Um extrato total de P. falciparum (PfET) do clone 3D7, foi selecionado como o nosso alvo de estudo. A antigenicidade do PfET foi avaliada usando soro humano de indivíduos anteriormente expostos à malária. Foram analisadas 436 amostras de soro, das quais 419 soros de indivíduos, com história clínica de malária, oriundos de alguns países de Africa, América e Asia, previamente diagnosticados na Unidade de Clínica Tropical do IHMT no 2012; e 17 soros de indivíduos sem história clínica de malária foram usados como controle negativo. Foram determinados anticorpos Totais, IgM, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 anti-P. falciparum por ELISA. Foi feita a caracterização imunoquímica de antigénios de P. falciparum responsáveis por tais reatividades serológicas por immunoblotting. Foi efetuada uma análise in silico de frações proteicas de P. falciparum previamente identificadas por espectrometria de massa. Resultados: Anticorpos anti-P. falciparum reconheceram os antigénios do PfET, com maior contribuição de anticorpos tipo IgG (72%), IgG1 (43%) e IgG3 (64%). O immunoblotting revelou frações proteicas de P. falciparum com massa molecular entre 20 -190 kDa, das quais bandas com massa molecular de 25, 35, 40, 45, 75, 80, 100 e 150 kDa apresentaram maior reatividade antigénica. A análise in silico identificou 29 epitopes correspondentes a seis proteínas de P. falciparum previamente identificadas: Elongation factor 1 alpha; Protein disulphide isomerase (PDI), Phosphoglycerate kinase; Glucose regulated protein homologue; Rhoptry associated protein 2 (RAP-2); Rhoptry-associated protein 3 (RAP-3); a análise in silico sugere que RAP-2, RAP-3, PDI, apresentam características imunogénicas essenciais como epitopes consensos, signal peptidica, domínio transmembrana. Conclusão: Este estudo mostra a caracterização de antigénios do PfET, tendo em conta que algumas das suas proteínas apresentaram várias características imunogénicas importantes, como aqui se mostra, estas proteínas podem ser consideradas como um bom candidato à vacina. São assim recomendados estudos complementares destinados a avaliar a sua capacidade de imunogenicidade e indução de proteção contra a malaria. Futuramente espera-se potencializar a ação destas proteínas e contribuir na caracterização de potenciais novos alvos antigénicos de P. falciparum importantes para o diagnóstico sorológico ou candidatos a vacina para malaria. |
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