Publicação
Aplicação da Toxicologia Forense na determinação de xenobióticos em amostras de sangue por cromatografia líquida associada a espetrometria de massa
| Resumo: | A Cannabis é a droga ilícita mais usada no mundo, integrando a maioria dos registos das infrações de posse/consumo de substâncias ilícitas. A planta é constituída por uma elevada variedade de compostos, dentro dos quais se incluem os canabinóides, podendo apresentar um forte efeito psicoativo. Estes compostos caracterizam-se por serem constituídos por mais de 21 átomos de carbono, assim como por se encontrarem, exclusivamente, na planta Cannabis sativa, sendo o Δ9-tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) o composto ativo com maior poder psicoativo. Em toxicologia forense, é essencial ter um método rápido e eficiente que permita usar uma pequena quantidade de amostra biológica para a determinação e quantificação de baixas concentrações de canabinóides.Assim, foi estudada a técnica de precipitação proteica com acetonitrilo de 0,1 mL de amostra de sangue, para a determinação de Δ9-THC, 11-hidroxi-Δ9-tetrahidrocanabinol (11-OH-THC) e 11-nor-9-carboxi-Δ9-tetrahidrocanabinol (THCCOOH), por cromatografia líquida de alta resolução acoplada a espetrometria de massa (LC-MS/MS), em modo de scan de monitorização de reações múltiplas (MRM). Na separação cromatográfica foi utilizada uma coluna Acquity UPLC® HSS T3 (100 mm x 2,1 mm, 1,8 µm), uma fase móvel em gradiente constituída por formato de amónia aquoso 2 mM (ácido fórmico 0,1%) e metanol, com um fluxo de 0,4 mL/min, um volume de injeção de 5 µL e um tempo de corrida de 10 min. O método foi validado de acordo com critérios e diretrizes internacionalmente aceites. O método em modo MRM demonstrou ser seletivo e linear entre 0,5-100 ng/mL (r2>0,998). Os limites inferiores de quantificação (LQ) corresponderam à menor concentração utilizada para as curvas de calibração. Os coeficientes de variação obtidos para a exatidão e precisão foram inferiores a 20% e reprodutibilidade obteve valores aceitáveis (z-score < 3). As recuperações médias encontram-se entre 94% e 96% para os níveis de concentração estudados (1 ng/mL, 5 ng/mL e 50 ng/mL). O efeito matriz traduz-se num efeito de intensificação iónica para todos os analítos. Não foram observados compostos interferentes significativos ou arrastamento.O método validado fornece um procedimento sensível, eficiente e robusto para a quantificação de canabinóides no sangue por aplicação de precipitação proteica de 0,1 mL de amostras analisadas por LC-MS/MS. |
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| Autores principais: | Martinho, Beatriz Seiça |
| Assunto: | Canabinóides LC-MS/MS Precipitação proteica Sangue Validação Cannabinoids LC-MS/MS Protein precipitation Blood Validation |
| Ano: | 2022 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Coimbra |
| Idioma: | português |
| Origem: | Estudo Geral - Universidade de Coimbra |
| Resumo: | A Cannabis é a droga ilícita mais usada no mundo, integrando a maioria dos registos das infrações de posse/consumo de substâncias ilícitas. A planta é constituída por uma elevada variedade de compostos, dentro dos quais se incluem os canabinóides, podendo apresentar um forte efeito psicoativo. Estes compostos caracterizam-se por serem constituídos por mais de 21 átomos de carbono, assim como por se encontrarem, exclusivamente, na planta Cannabis sativa, sendo o Δ9-tetrahidrocanabinol (Δ9-THC) o composto ativo com maior poder psicoativo. Em toxicologia forense, é essencial ter um método rápido e eficiente que permita usar uma pequena quantidade de amostra biológica para a determinação e quantificação de baixas concentrações de canabinóides.Assim, foi estudada a técnica de precipitação proteica com acetonitrilo de 0,1 mL de amostra de sangue, para a determinação de Δ9-THC, 11-hidroxi-Δ9-tetrahidrocanabinol (11-OH-THC) e 11-nor-9-carboxi-Δ9-tetrahidrocanabinol (THCCOOH), por cromatografia líquida de alta resolução acoplada a espetrometria de massa (LC-MS/MS), em modo de scan de monitorização de reações múltiplas (MRM). Na separação cromatográfica foi utilizada uma coluna Acquity UPLC® HSS T3 (100 mm x 2,1 mm, 1,8 µm), uma fase móvel em gradiente constituída por formato de amónia aquoso 2 mM (ácido fórmico 0,1%) e metanol, com um fluxo de 0,4 mL/min, um volume de injeção de 5 µL e um tempo de corrida de 10 min. O método foi validado de acordo com critérios e diretrizes internacionalmente aceites. O método em modo MRM demonstrou ser seletivo e linear entre 0,5-100 ng/mL (r2>0,998). Os limites inferiores de quantificação (LQ) corresponderam à menor concentração utilizada para as curvas de calibração. Os coeficientes de variação obtidos para a exatidão e precisão foram inferiores a 20% e reprodutibilidade obteve valores aceitáveis (z-score < 3). As recuperações médias encontram-se entre 94% e 96% para os níveis de concentração estudados (1 ng/mL, 5 ng/mL e 50 ng/mL). O efeito matriz traduz-se num efeito de intensificação iónica para todos os analítos. Não foram observados compostos interferentes significativos ou arrastamento.O método validado fornece um procedimento sensível, eficiente e robusto para a quantificação de canabinóides no sangue por aplicação de precipitação proteica de 0,1 mL de amostras analisadas por LC-MS/MS. |
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