Publicação
Targeting and regulatory mechanisms in chromosome-wide gene regulation using Drosophila melanogaster as a model organism
| Resumo: | O cromossoma 4 de Drosophila melanogaster é muito heterocromático, sendo rico em DNA satélite e DNA de elementos transposáveis. Apesar das suas propriedades heterocromáticas, o cromossoma 4 tem uma densidade génica e expressão semelhantes às dos principais braços cromossómicos. A expressão da maioria dos genes do cromossoma 4 é regulada por pelo menos duas diferentes proteinas: Painting of Fourth (POF) que estimula o output transcricional e Heterochromatin Protein 1 (HP1) que reprime o output transcricional. POF e HP1 ligam-se interdependentemente ao cromossoma 4 e a ligação e propagação de POF depende da heterocromatina. POF e HP1 colocalizam em exões de genes activos do cromossoma 4 e adicionalmente a HP1 liga-se aos promotores dos genes activos. HP1 é recrutada pela metilação de H3K9 a qual é realizada pelas HKMTs SU(VAR)3-9 e SETDB1. Experiências de imunocitoquímica demonstraram que SU(VAR)3-9 é responsável pela metilação de H3K9 principalmente na região centromérica enquanto que SETDB1 produz H3K9 no cromossoma 4, o que resulta no recrutamento de HP1 para essas regiões. Com o objectivo de perceber o papel destas HKMTs no recrutamento de HP1, realizámos ChIP-on-chip e experiências de imunocitoquímica em mutantes Su(var)3-9, Setdb1 e Pof e analisámos a ligação de HP1. Descobrimos que SETDB1 e POF são essenciais no recrutamento de HP1 para exões de genes activos do cromossoma 4 e que SU(VAR)3-9 é essencial para recrutar HP1 para as regiões centroméricas de todos os cromossomas. Adicionalmente, a ligação de HP1 a promotores em genes do cromossoma 4 assim como dos outros cromossomas é independente de SETDB1 e de SU(VAR)3-9. Propomos que a ligação de HP1 aos promotores ocorre de um modo independente da metilação de H3K9 ou que existe outra HKMT responsável pela produção de H3K9me especificamente nos promotores. |
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| Autores principais: | Figueiredo, Ana Margarida Adónis, 1986- |
| Assunto: | Biologia molecular Expressão génica Imunocitoquímica Drosophila melanogaster Teses de mestrado - 2010 |
| Ano: | 2010 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | O cromossoma 4 de Drosophila melanogaster é muito heterocromático, sendo rico em DNA satélite e DNA de elementos transposáveis. Apesar das suas propriedades heterocromáticas, o cromossoma 4 tem uma densidade génica e expressão semelhantes às dos principais braços cromossómicos. A expressão da maioria dos genes do cromossoma 4 é regulada por pelo menos duas diferentes proteinas: Painting of Fourth (POF) que estimula o output transcricional e Heterochromatin Protein 1 (HP1) que reprime o output transcricional. POF e HP1 ligam-se interdependentemente ao cromossoma 4 e a ligação e propagação de POF depende da heterocromatina. POF e HP1 colocalizam em exões de genes activos do cromossoma 4 e adicionalmente a HP1 liga-se aos promotores dos genes activos. HP1 é recrutada pela metilação de H3K9 a qual é realizada pelas HKMTs SU(VAR)3-9 e SETDB1. Experiências de imunocitoquímica demonstraram que SU(VAR)3-9 é responsável pela metilação de H3K9 principalmente na região centromérica enquanto que SETDB1 produz H3K9 no cromossoma 4, o que resulta no recrutamento de HP1 para essas regiões. Com o objectivo de perceber o papel destas HKMTs no recrutamento de HP1, realizámos ChIP-on-chip e experiências de imunocitoquímica em mutantes Su(var)3-9, Setdb1 e Pof e analisámos a ligação de HP1. Descobrimos que SETDB1 e POF são essenciais no recrutamento de HP1 para exões de genes activos do cromossoma 4 e que SU(VAR)3-9 é essencial para recrutar HP1 para as regiões centroméricas de todos os cromossomas. Adicionalmente, a ligação de HP1 a promotores em genes do cromossoma 4 assim como dos outros cromossomas é independente de SETDB1 e de SU(VAR)3-9. Propomos que a ligação de HP1 aos promotores ocorre de um modo independente da metilação de H3K9 ou que existe outra HKMT responsável pela produção de H3K9me especificamente nos promotores. |
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