Publicação
Regulation of breast cancer extracellular matrix to boost breast cancer immunity
| Resumo: | O cancro da mama é um dos tipos de cancro mais frequentemente detetados em mulheres. Os cancros luminais são os cancros de mama mais comuns, onde o luminal B apresenta alta agressividade e genes relacionados à proliferação tumoral. O desenvolvimento do cancro da mama está associado aos fatores celulares e solúveis da matriz extracelular (ECM). A ECM promove a migração celular conectando o citoesqueleto das células com aderências focais (FA). A presença de FA está relacionada com a fosforilação da tirosina, sendo a quinase de adesão focal (FAK) uma das mais prontamente fosforiladas no cancro. A superexpressão de FAK está associada à proliferação de células tumorais, contribuindo também para a ativação das células endoteliais, que expressam a P-selectina na sua superfície. A ação da P-selectina é desencadeada pela sua interação com o ligando-1 da glicoproteína P-selectina (PSGL-1) expresso nas células tumorais, promovendo a circulação de células cancerígenas e metástase. Como a interação entre FAK e P-selectina é pouco compreendida, este projeto tem como objetivo avaliar o efeito antitumoral sinérgico da interação entre os inibidores da FAK e da P-selectina e a nanovacina direcionadas a DC que entregam antígenos associados a tumores e adjuvantes, em modelos esferóides 3D. A expressão de FAK, FAK fosforilada (pFAK), P-selectina e PSGL-1 foram avaliadas em células EO771 e do microambiente tumoral (TME) recolhidas de ratinhos inoculados com EO771. Verificou-se que FAK, pFAK e P-selectina estavam superexpressas em células EO771 TME (> 97%). Para modular o TME em direção a um microambiente efetor imunológico, antes de avaliar o papel do defactinib (inibidor da FAK) e do KF-38789 (inibidor da P-selectina) na função e frequência das células imunes dentro do TME, avaliámos o impacto do defactinib e do KF-38789 na viabilidade das células EO771 e TME EO771. Consequentemente, o defactinib e o KF-38789 induziram um efeito citotóxico significativo nas células EO771 para concentrações acima de 1 e 0,1 μM, respetivamente. Além disso, foi obtida uma diminuição significativa na viabilidade das células EO771 TME para concentrações de defactinib e KF-38789 acima de 0,5 e 0,05 µM, respetivamente. Finalmente, para avaliar o impacto do efeito sinérgico entre a inibição da FAK e da P-selectina combinada com a nanovacina, foi realizada a co-cultura dos esferóides 3D de tumores EO771 (EO771 TME) e esplenócitos. De acordo com as diferentes condições, o tratamento de esferóides 3D do cancro da mama com KF-38789 e a nanovacina isoladamente ou em combinação com o tratamento com defactinib mostrou-se promissor na modulação da invasão tumoral. Finalmente, uma inibição completa do sprouting resultando na morte de células esferóides 3D foi alcançada com a combinação de defactinib e esplenócitos estimulados seguido de KF-38789, representando o efeito sinérgico mais promissor entre os tratamentos testados. Considerando a estratégia terapêutica mais promissora e eficaz, levanta-se a hipótese de que o defactinib primeiro modula o TME para permitir uma melhor infiltração imunológica desencadeada pela vacinação, enquanto a P-selectina previne a proliferação de células cancerígenas. |
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| Autores principais: | Santos, Ana Carolina Branco |
| Assunto: | Breast cancer Focal adhesion kinase P-selectin 3D models tumor microenvironment Teses de mestrado - 2023 |
| Ano: | 2023 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso restrito |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | O cancro da mama é um dos tipos de cancro mais frequentemente detetados em mulheres. Os cancros luminais são os cancros de mama mais comuns, onde o luminal B apresenta alta agressividade e genes relacionados à proliferação tumoral. O desenvolvimento do cancro da mama está associado aos fatores celulares e solúveis da matriz extracelular (ECM). A ECM promove a migração celular conectando o citoesqueleto das células com aderências focais (FA). A presença de FA está relacionada com a fosforilação da tirosina, sendo a quinase de adesão focal (FAK) uma das mais prontamente fosforiladas no cancro. A superexpressão de FAK está associada à proliferação de células tumorais, contribuindo também para a ativação das células endoteliais, que expressam a P-selectina na sua superfície. A ação da P-selectina é desencadeada pela sua interação com o ligando-1 da glicoproteína P-selectina (PSGL-1) expresso nas células tumorais, promovendo a circulação de células cancerígenas e metástase. Como a interação entre FAK e P-selectina é pouco compreendida, este projeto tem como objetivo avaliar o efeito antitumoral sinérgico da interação entre os inibidores da FAK e da P-selectina e a nanovacina direcionadas a DC que entregam antígenos associados a tumores e adjuvantes, em modelos esferóides 3D. A expressão de FAK, FAK fosforilada (pFAK), P-selectina e PSGL-1 foram avaliadas em células EO771 e do microambiente tumoral (TME) recolhidas de ratinhos inoculados com EO771. Verificou-se que FAK, pFAK e P-selectina estavam superexpressas em células EO771 TME (> 97%). Para modular o TME em direção a um microambiente efetor imunológico, antes de avaliar o papel do defactinib (inibidor da FAK) e do KF-38789 (inibidor da P-selectina) na função e frequência das células imunes dentro do TME, avaliámos o impacto do defactinib e do KF-38789 na viabilidade das células EO771 e TME EO771. Consequentemente, o defactinib e o KF-38789 induziram um efeito citotóxico significativo nas células EO771 para concentrações acima de 1 e 0,1 μM, respetivamente. Além disso, foi obtida uma diminuição significativa na viabilidade das células EO771 TME para concentrações de defactinib e KF-38789 acima de 0,5 e 0,05 µM, respetivamente. Finalmente, para avaliar o impacto do efeito sinérgico entre a inibição da FAK e da P-selectina combinada com a nanovacina, foi realizada a co-cultura dos esferóides 3D de tumores EO771 (EO771 TME) e esplenócitos. De acordo com as diferentes condições, o tratamento de esferóides 3D do cancro da mama com KF-38789 e a nanovacina isoladamente ou em combinação com o tratamento com defactinib mostrou-se promissor na modulação da invasão tumoral. Finalmente, uma inibição completa do sprouting resultando na morte de células esferóides 3D foi alcançada com a combinação de defactinib e esplenócitos estimulados seguido de KF-38789, representando o efeito sinérgico mais promissor entre os tratamentos testados. Considerando a estratégia terapêutica mais promissora e eficaz, levanta-se a hipótese de que o defactinib primeiro modula o TME para permitir uma melhor infiltração imunológica desencadeada pela vacinação, enquanto a P-selectina previne a proliferação de células cancerígenas. |
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