O cromossoma 4 de Drosophila melanogaster é muito heterocromático, sendo rico em DNA satélite e DNA de elementos transposáveis. Apesar das suas propriedades heterocromáticas, o cromossoma 4 tem uma densidade génica e expressão semelhantes às dos principais braços cromossómicos. A expressão da maioria dos genes do cromossoma 4 é regulada por pelo menos duas diferentes proteinas: Painting of Fourth (POF) que estimula o output transcricional e Heterochromatin Protein 1 (HP1) que reprime o output transcricional. POF e HP1 ligam-se interdependentemente ao cromossoma 4 e a ligação e propagação de POF depende da heterocromatina. POF e HP1 colocalizam em exões de genes activos do cromossoma 4 e adicionalmente a HP1 liga-se aos promotores dos genes activos. HP1 é recrutada pela metilação de H3K9 a qual é realizada pelas HKMTs SU(VAR)3-9 e SETDB1. Experiências de imunocitoquímica demonstraram que SU(VAR)3-9 é responsável pela metilação de H3K9 principalmente na região centromérica enquanto que SETDB1 produz H3K9 no cromossoma 4, o que resulta no recrutamento de HP1 para essas regiões. Com o objectivo de perceber o papel destas HKMTs no recrutamento de HP1, realizámos ChIP-on-chip e experiências de imunocitoquímica em mutantes Su(var)3-9, Setdb1 e Pof e analisámos a ligação de HP1. Descobrimos que SETDB1 e POF são essenciais no recrutamento de HP1 para exões de genes activos do cromossoma 4 e que SU(VAR)3-9 é essencial para recrutar HP1 para as regiões centroméricas de todos os cromossomas. Adicionalmente, a ligação de HP1 a promotores em genes do cromossoma 4 assim como dos outros cromossomas é independente de SETDB1 e de SU(VAR)3-9. Propomos que a ligação de HP1 aos promotores ocorre de um modo independente da metilação de H3K9 ou que existe outra HKMT responsável pela produção de H3K9me especificamente nos promotores.

Compete à escola fomentar o desenvolvimento de competências sociais, cognitivas e afectivas, que permitam aos alunos serem cidadãos mais autónomos, críticos e responsáveis. O presente estudo cujo teve como principal objectivo conhecer os impactos do programa de formação em ensino experimental das ciências (PFEEC) nas aprendizagens dos alunos do 1º ciclo do ensino básico. Foram constituídas as seguintes questões de investigação: a) quais as aprendizagens dos alunos do 1º ciclo do ensino básico quando realizam actividades experimentais (tal como são propostas no âmbito do programa de formação em ensino experimental das ciências)?; b) o que pensam os alunos do 1º ciclo do ensino básico sobre as actividades experimentais realizadas no âmbito do programa do programa de formação em estudo? Nesta investigação, de natureza qualitativa, participaram trezentos e dezasseis alunos do 1º CEB do distrito de Santarém (seleccionados aleatoriamente da totalidade de alunos cujos professores frequentaram o PFEEC nesse distrito no ano lectivo 2008/09) e 12 docentes seleccionados de um total de 124 participantes no programa de formação em ensino experimental das ciências. Para responder às questões foram utilizados dois métodos distintos de recolha de dados: questionários aplicados aos alunos e análise documental dos portefólios elaborados dos professores no âmbito do programa de formação. Através dos resultados obtidos pode-se constatar que os alunos realizaram, principalmente, aprendizagens ao nível de conceitos científicos, capacidades de resolução de problemas e atitudes e valores.

Esta investigação tem como objectivo perceber de que modo o trabalho com as diferentes representações de número racional, nos seus diferentes significados, pode contribuir para a compreensão da noção de número racional e dos conceitos de ordenação e comparação de número racional e equivalência de fracções, em alunos do 5.º ano, tendo por base uma unidade de ensino e uma abordagem de cunho exploratório. O quadro teórico evidencia a complexidade do conceito de número racional, constatando-se que os alunos têm muita dificuldade na aquisição da noção e do sentido do número racional. Assume-se que o ensino dos números racionais deve: (i) ter como base os conhecimentos anteriores dos alunos; (ii) enfatizar as inter-relações entre os vários significados de número racional; e (iii) reforçar as relações entre conceitos e procedimentos, bem como as conversões dentro e entre as diferentes representações. Este estudo constitui uma investigação sobre a minha prática profissional que segue uma abordagem qualitativa e interpretativa, com observação participante. A recolha de dados foi realizada numa turma do 5.º ano, sendo estudada a própria turma e, de forma mais aprofundada, uma aluna objecto de estudo de caso. A recolha de dados inclui dois testes, duas entrevistas, produções dos alunos e registos em diário de bordo. Os resultados mostram que os alunos melhoraram a sua compreensão da representação fraccionária e da percentagem e até da representação decimal. Contudo, continuam a mostrar dificuldades na representação de fracções impróprias. Também melhoraram na sua compreensão da comparação e ordenação dos números racionais, utilizando, sobretudo, a representação decimal. Os alunos revelam compreender a equivalência de fracções, mas só a usam pontualmente como estratégia para comparar fracções. Isso, possivelmente, deve-se ao trabalho desenvolvido durante a unidade de ensino, dado que os alunos puderam utilizar as mais diversas representações. A hipótese de ensino-aprendizagem fica sustentada pela compreensão que os alunos revelam dos números racionais como números, mostrando compreender que um número racional pode ser representado de diversas formas e mostrando flexibilidade na escolha da representação mais adequada, ou onde se sentem mais à vontade e com a qual conseguem resolver as tarefas propostas.

Devido à crise energética e problemas ambientais, houve uma forte aposta na diversificação de recursos energéticos, particularmente nas energias renováveis, de forma a assegurar a diversidade e a segurança no abastecimento de energia. A Energia eólica é uma das mais promissoras, sendo utilizada em pequena e grande escala, maioritariamente em parques eólicos capazes de gerar grande quantidade de energia. O diâmetro do rotor tem aumentado significativamente ao longo dos anos, sendo necessário estudar os efeitos adversos que ocorrem nas pás durante a sua rotação. A interferência aerodinâmica que ocorre, quando as pás de uma turbina de eixo horizontal, se encontram próximas da torre, é designada efeito sombra. Este efeito provoca um défice da velocidade do vento causado pela obstrução da torre quando cada pá passa à frente dessa no seu movimento de rotação, causando perda de potência e vibrações na estrutura. Este efeito é mais significativo quando o rotor se encontra a jusante da torre, downwind, provocando flexões nas pás e contribuindo para o seu stress, aumentando o ruído. Para as turbinas com o rotor a montante, upwind, da torre este efeito é menos significativo sentindo-se no entanto oscilações significativas nos coeficientes aerodinâmicos da pá. O presente trabalho consistiu no estudo deste efeito através de ensaios em túnel de vento dos modelos da torre e da pá, e a determinação dos coeficientes aerodinâmicos desta para o escoamento não perturbado e para o escoamento afectado pelo posicionamento da torre, numa turbina upwind, considerando várias posições relativas da trajectória da pá quando esta passa em frente à torre. Para a realização dos ensaios utilizou-se um perfil alar 2D e um cilindro cujo diâmetro e afastamento da pá foram escalados a partir da pá, tomando a dimensão da corda como referência. Finalmente foram analisados os resultados e constatada a importância desta interferência aerodinâmica.

A instabilidade genética é uma propriedade constitutiva das células tumorais que contribui para a progressão do processo de cancerigénese. Trabalhos recentes indicam que esta instabilidade surge num estado bastante precoce da tumorigénese como consequência de defeitos de replicação (Halazonetis et al., 2008). Contudo, os mecanismos moleculares envolvidos não se encontram ainda bem esclarecidos. Os garfos de replicação são estruturas muito frágeis que encontram frequentemente obstáculos como complexos proteicos ou lesões de ADN. A paragem não controlada destes garfos pode provocar a formação de quebras cromossómicas (Tourrière et al., 2005) devido à acumulação de ADN de cadeia simples. Com o propósito de limitar esta instabilidade genómica durante a fase S, as células desenvolveram sistemas de vigilância chamados checkpoints da fase S, vias de transdução de sinal conservadas na evolução que estão frequentemente desreguladas nos cancros. Um conhecimento mais aprofundado destes mecanismos deverá permitir-nos compreender melhor a origem da instabilidade genética das células tumorais e, também, de potenciar o efeito de agentes genotóxicos que têm como alvo os garfos de replicação. Os mecanismos de replicação são altamente conservados entre os eucariotas, portanto a estratégia abordada no nosso laboratório é monitorizar as respostas a stress replicativo num modelo simples, a levedura de gemulação S. cerevisiae, e então realizar estes estudos em células humanas. Recentemente, iniciámos um estudo em grande escala que visa identificar novos factores implicados na detecção de paragens dos garfos de replicação em S. cerevisiae. Este estudo permitiu-nos identificar a proteína CTF18 como um novo mediador do checkpoint de replicação, essencial para a sua activação, implicado na manutenção da integridade dos garfos de replicação (Crabbé et al., in press). CTF18 (Chromosome Transmission Fidelity Factor 18 homolog) faz parte de um complexo RFC alternativo que realiza o loading da proteína PCNA, factor de processividade das polimerases epara o ADN. O complexo proteico heteropentamérico RFC é composto por uma subunidade grande (RFC1) e quatro pequenas subunidades (RFC2 a 5). Em eucariotas, foram identificados três complexos loaders de PCNA envolvidos em respostas checkpoint (Rad17-RFC), coesão entre cromatídios irmãos (CTF18-RFC) e manutenção da estabilidade genética (Elg1-RFC). CTF18 é necessário para a transmissão cromossómica precisa em leveduras e é altamente conservado em eucariotas. Ao contrário de outros complexos RFC, CTF18-RFC também se associa com os factores de coesão da cromatina Dcc1 e CTF8 para formar um complexo heteroheptamérico e é necessário para o estabelecimento da coesão entre cromatídios irmãos durante a fase S (Lengronne et al., 2006). Este complexo deposita também PCNA no ADN de cadeia simples numa reacção dependente de ATP. O objectivo do meu trabalho foi caracterizar a função de CTF18 na resposta ao stress replicativo em células humanas normais e tumorais. Em primeiro lugar mostrei que, como em S. Cerevisiae, CTF18 humano está associado à cromatina apenas na fase S. De seguida, procurei determinar em que medida esta proteína contribui para a activação do checkpoint de replicação. Para isto, utilizei diferentes siRNAs e shRNAs que permitem uma depleção parcial ou completa de CTF18 em diferentes linhas tumorais (HCT116, HeLa, HEK293T and U20S) assim como em fibroblastos primários (IMR90). A activação do checkpoint de replicação foi analisada em presença ou em ausência de HU (um inibidor da síntese de dNTPs) em células controle ou células com depleção de CTF18 através da análise de CHK1 fosforilada/activa. CHK1 é a cinase efectora do checkpoint de replicação de ADN que fosforila a fosfatase Cdc25 de forma a bloquear a progressão do ciclo celular em resposta a stress replicativo. Aquando da depleção de CTF18 com siRNAs e com a linha celular estável induzindo shRNAs, tanto na ausência como na presença de stress, não consegui detectar diferenças significativas na activação do checkpoint. Surpreendentemente, observei uma indução mais rápida do checkpoint de replicação de ADN em células deficientes em CTF18 expostas a HU, o que poderia indicar um aumento do colapso dos garfos de replicação nestas células sob stress replicativo. Para testar esta possibilidade, tenho utilizado a técnica de Combing Molecular de ADN para determinar se CTF18 é necessário na progressão normal dos garfos de replicação e/ou para recuperação após um stress genotóxico. Este método utiliza um menisco de ar/água para alongar e alinhar moléculas individuais de ADN de uma maneira uniforme. Neste processo, o ADN liga-se a lamelas silanizadas pelas extremidades e as moléculas alinhadas são estendidas a 150% do seu comprimento cristalográfico pelo menisco de ar que recua com uma velocidade constante exercendo assim uma força constante nas moléculas aderidas. Uma vez que o ADN adere às lamelas, é irreversivelmente fixado e não se separa mesmo quando é rehidratado (Bensimon et al., 1994). O Combing Molecular permite a análise dos parâmetros de replicação (velocidade dos garfos, taxa de início de replicação) quando o ADN é extraído de células que foram marcadas com análogos halogenados de timidina como BrdU, CldU e IdU. Em experiências típicas, culturas celulares assíncronas são marcadas com pulsos de IdU e CldU de forma a determinar a orientação dos garfos de replicação. Os nucleótidos halogenados são detectados ao longo das fibras de ADN utilizando anti-corpos fluorescentes e visualizados por imunofluorescência. As distâncias percorridas pelos garfos durante as marcações são medidas usando o software MetaMorph. Neste estudo, mais de 100 moléculas individuais de ADN foram analisadas relativamente à velocidade de progressão dos garfos de replicação para cada condição experimental. Nas células transfectadas com siRNAs contra CTF18, verifiquei que os garfos de replicação se movem mais lentamente na presença de HU, que é uma reminiscência do que foi observado nos mutantes de levedura ctf18(Crabbé et al., in press). Estes dados sugerem que CTF18 humano poderá estar implicado na manutenção dos garfos de replicação retidos durante a replicação. Visto que os mutantes ctf18de levedura acumulam sinais de dano de ADN nos garfos retidos por HU, verifiquei, de seguida, se é também o caso em células humanas deficientes em CTF18. Para este fim, utilizei a forma fosforilada da variante de histona H2AX (γH2AX), como marcador de quebras simples e duplas no ADN. γH2AX foi quantificada por Western blotting em ausência e presença de stress replicativo. Um ligeiro mas reprodutível aumento de γH2AX foi observado na presença de stress em células transfectadas com siRNA CTF18, o que é consistente com os meus resultados de Combing. Estes dados sugerem que os garfos de replicação são menos estáveis nas células deficientes em CTF18 expostas a HU e que os garfos danificados induzem uma activação do checkpoint mais rápida. Em conjunto, os meus dados sugerem que CTF18 tem uma função no replissoma para conservar os garfos de replicação retidos na presença de stress, mas não tem o mesmo papel na activação do checkpoint como nas leveduras. Várias razões podem ser invocadas para explicar esta diferença. Por exemplo, a quantidade de CTF18 restante após RNA de interferência poderá ser suficiente para desempenhar a sua função no checkpoint. Tentativas têm sido feitas para melhorar a depleção de CTF18 com construções de shRNA induzíveis mas não tiveram êxito. Para além disso, em células primárias, que têm menos CTF18, a maior a depleção obtida provoca um aumento da mortalidade celular e não permitiu uma análise adicional do checkpoint. Uma outra explicação poderia ser que CTF18 humano está de facto envolvido na resposta do checkpoint da replicação de ADN, mas o defeito deste checkpoint em células deficientes em CTF18 é mascarado pela resposta do dano de ADN induzida pelo colapso dos garfos em HU. Estudos em leveduras de gemulação têm mostrado que é realmente o caso (Crabbé et al., in press). No entanto, esta possibilidade é difícil de abordar em células humanas visto que, ao contrário das leveduras, as vias dos checkpoint do dano e da replicação de ADN são altamente interdependentes e não podem ser funcionalmente separadas. Experiências adicionais são, portanto, necessárias para concluir definitivamente se CTF18 medeia ou não a resposta da replicação do ADN em células humanas, como acontece nas leveduras de gemulação.

O presente trabalho aborda um problema comum a muitos dos actuais fornecedores de serviços Internet (ISPs): mitigação eficiente de tráfego malicioso na sua rede. Este tráfego indesejado impõe um desperdício de recursos de rede o que leva a uma consequente degradação da qualidade de serviço. Cria também um ambiente inseguro para os clientes, minando o potencial oferecido pela Internet e abrindo caminho para actividades criminosas graves. Algumas das principais condicionantes na criação de sistemas capazes de resolver estes problemas são: a enorme quantidade de tráfego a ser analisado, o facto da Internet ser inerentemente anónima e a falta de incentivo para os operadores de redes de trânsito em bloquear este tipo de tráfego. No âmbito de um ISP de média escala, este trabalho concentra-se em três áreas principais: origens de tráfego malicioso, classificação de segurança de redes vizinhas ao ISP e políticas de intervenção. Foram colectados dados de rede considerando, determinados tipos de tráfego malicioso: varrimento de endereços e inundação de fluxos de ligações; assim como informação de acessibilidades rede: mensagens de actualização de BGP disponibilizadas pelo RIPE Routing Information Service. Analisámos o tráfego malicioso em busca de padrões de rede, o que nos permitiu compreender que é maioritariamente originário de um subconjunto muito pequeno de ASes na Internet. No âmbito de um ISP e de acordo com um conjunto de métricas de segurança, definimos uma expressão de correlação para quantificar os riscos de segurança associados a conexões com redes vizinhas, a qual denominámos Risk Score. Finalmente, propusemos técnicas para concretização das tarefas de rede necessárias à redução de tráfego malicioso de forma eficiente, se possível em cooperação com redes vizinhas / ASes. Não temos conhecimento de qualquer publicação existente que correlacione as características de tráfego malicioso de varrimento de endereços e inundação de fluxos de ligações, com informação de acessibilidades de rede no âmbito de um ISP, de forma a classificar a segurança das vizinhanças de rede, com o propósito de decidir filtrar o tráfego de prefixos específicos de um AS ou bloquear todo o tráfego proveniente de um AS. Acreditamos que os resultados apresentados neste trabalho podem ser aplicados imediatamente em cenários reais, permitindo criar ambientes de rede mais seguros e escaláveis, desta forma melhorando as condições de rede necessárias ao desenvolvimento de novos serviços.

Escrever sobre acontecimentos emocionalmente significativos tem sido associado a benefícios ao nível da saúde mental e bem-estar psicológico, sendo que a experiência de emoções positivas tem servido, essencialmente, como indicador do progresso psicoterapêutico e da mudança alcançada. Contudo, algumas teorias afirmam que as emoções positivas, mais do que sinalizarem, produzem um funcionamento óptimo, ajudando os indivíduos no processo de elaboração do problema. Assim, a presente investigação convidou dez adolescentes, com idades entre os 12 e os 18 anos, a escreverem sobre um momento especial, em que se sentiram orgulhosos de si e/ou sobre o maior problema que enfrentam, sendo que cinco escreveram primeiro sobre uma experiência emocional positiva e depois a negativa, e dois escreveram apenas sobre esta última. Pretendeu-se explorar de que forma a indução de emoções positivas pode influenciar o processo de escrita subsequente, relativo a um acontecimento emocionalmente perturbador. A existência de um grupo-controlo permitiu aferir o impacto do exercício de escrita no estado de humor dos adolescentes. A realização deste estudo produziu dois tipos de documentos escritos por cada participante: os textos que escreveram e a transcrição da entrevista realizada logo após a elaboração dos mesmos. Ambos foram interpretados recorrendo à metodologia de análise de conteúdo qualitativa. Os resultados sugerem que a experiência de emoções positivas influenciou a forma como os adolescentes pensavam sobre o problema e elaboravam uma estratégia de resolução, mostrando ter efeitos positivos imediatos no seu estado de humor. Conclui-se que, paralelamente aos benefícios associados ao paradigma de escrita expressiva, deve considerar-se o contributo que a experiência de emoções positivas pode ter neste processo, por gerarem mudança e potenciarem esses benefícios, alterando a forma como se pensa sobre o problema, e orientando o pensamento para a criação de soluções, com efeitos positivos imediatos no nível do funcionamento e bem-estar psicológicos.

A Teoria da Relatividade Combinatória apresenta uma análise aos espectáculos para os quais contribuem, nas décadas de cinquenta e sessenta, nos Estados Unidos da América, o compositor John Cage, o coreógrafo Merce Cunningham e o artista visual Robert Rauschenberg, defendendo: (1) a existência de uma estética comum para a multiplicidade combinatória dos acontecimentos por si construídos, e (2) um reenquadramento da relação autores-acontecimentos--espectadores, fundamentado nas diferentes ligações desencadeadas pelos espectáculos, da sua criação à sua recepção.

As parasitoses intestinais (helmintoses e protozooses) representam um grave problema de saúde pública nos países em desenvolvimentos. A morbilidade causada por estes agentes patogénicos é na maioria das vezes relacionada com desnutrição, resultando em deficiências no desenvolvimento físico e cognitivo da população infantil, geralmente a mais afectada. Os principais mecanismos de transmissão dos parasitas intestinais estão associados com inadequadas práticas de higiene pessoal e doméstica, e com fontes de contaminação. O objectivo deste trabalho foi estudar a prevalência de parasitoses intestinais e a sua relação com o estado nutricional em 117 crianças com idades compreendidas dos 0 aos 15 anos, de uma comunidade rural situada em Bafatá, interior da Guiné-Bissau. As técnicas aplicadas, nas amostras de fezes, foram a identificação morfológica das espécies por observação microscópica e a identificação molecular das espécies E. histolytica, E. dispar e E. moshkovskii. O exame parasitológico das fezes revelou a uma prevalência de 60,7% crianças infectadas com parasitas intestinais, das quais 33,3% apresentaram Giardia intestinalis, 28,2% Ancylostoma spp. e apenas 4 casos de infecção com E. histolytica. Através da análise de índices antropométricos foi possível verificar a prevalência de desnutrição aguda em 45,8% das crianças e de desnutrição crónica em 58,6%. A relação das parasitoses intestinais com o estado nutricional determinou a inexistência de relação com a desnutrição aguda, contudo foi verificada uma relação significativa entre as crianças parasitadas com desnutrição crónica. O parasita mais frequente encontrado nas crianças com desnutrição crónica foi Ancylostoma spp. Este estudo contribuiu para para o conhecimento da prevalência da giardíase e da ancilostomose em crianças da Guiné-Bissau, e a sua relação com a desnutrição aguda.

Este trabalho teve como objectivo a síntese do composto 8-β-C-glucosilgenisteína (8-β-C-glucosil-4‟,5,7-tri-hidroxi-isoflavona), o componente maioritário da planta medicinal Genista tenera, endémica da Ilha da Madeira. O extracto desta planta possui propriedades antidiabéticas, o que justifica o seu uso tradicional no tratamento da diabetes. Os componentes comercializados da planta foram investigados e nenhum deles, por si só, pode ser considerado responsável pela actividade exibida pela planta. Neste contexto tornou-se imperativa a síntese de 8-β-C-glucosilgenisteína. Um dos passos fulcrais da síntese da molécula-alvo consistiu na C-glucosilação de um precursor fenólico através de um rearranjo de tipo Fries, utilizando um activador e um dador de glucosilo adequados. Foram investigados os activadores BF3•Et2O, Cp2ZrCl2/AgClO4, TMSOTf e Sc(OTf)3 para os quais se escolheram os dadores de glucosilo mais apropriados, nomeadamente fluoreto de glucosilo para os três primeiros e acetato de glucosilo para o último. Analisando os resultados obtidos, verificou-se que o Sc(OTf)3 revelou ser o melhor activador, conduzindo a reacções mais limpas e com rendimentos moderados. A síntese do dador de glucosilo envolveu a perbenzilação de α-D-glucopiranósido de metilo, a desmetilação anomérica e consequente acetilação ou fluoração. O aceitador de glucosilo 2,4-dibenziloxi-6-hidroxiacetofenona foi sintetizado a partir de 2,4,6-tri-hidroxiacetofenona e foram investigadas duas vias sintéticas. A primeira consistiu na protecção selectiva de dois grupos hidroxilo com grupos etoximetilo (EOM), posterior benzilação, hidrólise dos grupos EOM e benzilação regioselectiva do grupo OH-4. A segunda via baseou-se na benzilação directa de OH-2 e OH-4, usando 2 equivalentes de BnBr/K2CO3. O passo seguinte consistiu na reacção do composto C-glucosilado com p-benziloxibenzaldeído (condensação aldólica) na presença de KOH e posterior acetilação dando origem à cetona α,β-insaturada característica das chalconas. O penúltimo passo envolveu um rearranjo oxidativo no qual o grupo benziloxifenilo migra do carbono olefínico 3 para o carbono 2 de forma a tornar possível a formação de uma isoflavona após o fecho do anel. Foram testados três métodos para o efeito utilizando TTN, DIB/TsOH ou HTIB. Por fim, uma hidrogenação catalítica utilizando Pd 10 % permitiu a remoção de todos os grupos benzilo obtendo-se o composto desejado, a 8-β-C-glucosilgenisteína.