A canábis tem sido utilizada como droga de abuso. As suas consequências são parcialmente compreendidas (ex. dependência, esquizofrenia, patologia das vias aéreas e infertilidade masculina). Na década de 90, foi iniciada a investigação sobre o seu potencial terapêutico. O sistema endocanabinóide foi descoberto e foram identificados recetores específicos: CB1, CB2, TRP e recetores atípicos. A investigação em animais e em humanos, mostra que os canabinóides sintéticos poderão ser muito úteis na terapêutica da dor aguda e da dor crónica.

As propriedades medicinais da Cannabis sativa L. são conhecidas desde a antiguidade. A descoberta de um sistema endocanabinóide, bem como os significativos avanços científicos verificados nos últimos anos, permitiram à comunidade científica conhecer melhor as ações farmacológicas e sinérgicas, a farmacocinética e os efeitos adversos dos canabinóides. Foi igualmente reconhecido um enorme potencial terapêutico destas substâncias, nomeadamente no tratamento da dor crónica, da sintomatologia associada à quimioterapia, à espasticidade, epilepsia, redução de náuseas e vómitos, estimulação do apetite, glaucoma e síndrome de la Tourette. A canábis provou ainda efeitos antitumorais em diferentes modelos cancerígenos, através de vários mecanismos de inibição da proliferação, angiogénese, metastização e quimiorresistência. Os estudos que confirmam a possibilidade de utilização terapêutica segura e com baixa toxicidade, permitiram a recente aprovação em Portugal, e noutros países, da utilização terapêutica de medicamentos, preparações e substâncias à base de canábis. Contudo, é ainda muito reduzida a sua utilização clínica. Em conclusão, apesar dos resultados promissores da utilização da canábis medicinal em diversas patologias, o uso clínico dos canabinóides é ainda controverso, sendo necessários mais estudos para a sua utilização na prática clínica baseada na evidência.

Os compostos canabinóides são conhecidos há várias décadas, após a descoberta dos receptores onde actuam: CB1 e CB2. Estes receptores localizam-se principalmente no Sistema Nervoso Central (SNC) e no Sistema Imunológico, exercendo várias funções. De entre os diversos compostos agonistas conhecidos, podemos destacar o delta-9-tetrahidrocanabinol (Δ9-THC), delta-8-tetrahidrocanabinol (Δ8-THC), anandamida (AEA) e 2-Araquidonoilglicerol (2-AG). Estes são compostos lipofílicos que podem exercer a sua função localmente ou em zonas distantes do local de produção através da ligação aos receptores. Uma vez que estes receptores se encontram distribuídos por todo o organismo, quer em animais, quer em humanos, os efeitos que podem ocorrer são muito diversos. Estes receptores participam na supressão da dor crónica e neuropática através da modulação de mecanismos inflamatórios, participam nos mecanismos do glaucoma (Glc), em doenças neurodegenerativas como a Esclerose Múltipla (EM) e no cancro. No entanto, alguns agonistas canabinóides exercem efeitos secundários graves e discutíveis, como a acção psicotrópica provocada pelo Δ9-THC. Esta monografia pretende debruçar-se sobre os estudos realizados e utilizações terapêuticas dos agonistas, bem como formas de ultrapassar os efeitos secundários de alguns deles para que o seu potencial possa ser valorizado.

A insulina e o sistema endocanabinóide (eCB) exercem funções muito importantes no organismo, tanto na periferia como no cérebro. Algumas destas funções são desempenhadas em comum, uma vez que as vias de sinalização intracelular destes dois sistemas se sobrepõem. Além disso, o recetor de canabinóides do tipo 1 (CB1R) tende a formar heterodímeros com recetores de tirosina cinase (RTKs). Recentemente, foi demonstrado através de experiências de voltage-clamp em whole-cell que a perfusão de insulina induz a libertação de eCBs nos corpos celulares dopaminérgicos da área tegmental ventral (VTA), revelando a existência de uma interação direta entre a insulina e o sistema endocanabinóide no sistema nervoso central (CNS). Assim, com o objetivo de caracterizar algumas das funções da insulina no cérebro e perceber como é que a sua ação depende do CB1R, foram realizadas experiências de electrofisiologia, para medição da transmissão sináptica, e de captação de glucose. Com este trabalho verificou-se que o efeito da insulina na transmissão sináptica basal é dependente do CB1R e das condições metabólicas do organismo (jejum ou diabetes induzida por streptozotocina (STZ)), em fatias de hipocampo de rato. Adicionalmente, o cálculo do paired-pulse ratio (PPR) demonstra que a ação da insulina também é pré-sináptica. A insulina diminuiu também a captação de glucose, em fatias de hipocampo e de córtex de rato, sendo este efeito dependente do CB1R. A deleção genética do CB1R diminuiu igualmente a captação de glucose. Finalmente, experiências preliminares de Western blot indicam que tanto o recetor de insulina (InR) como o CB1R estão localizados na zona pós-sináptica, no córtex de ratinhos e humanos. Assim, estes resultados sugerem uma interação entre o InR e o CB1R no cérebro, que poderá ser direta ou indireta. Experiências adicionais serão necessárias para perceber se estes dois recetores formam um heterodímero ou interagem indiretamente.

O glaucoma é a segunda causa de cegueira a nível mundial e é caracterizado pela perda progressiva de células ganglionares da retina (CGR). A pressão intraocular (PIO) é considerada o maior fator de risco para desenvolver glaucoma, e a redução da PIO é atualmente a única terapia utilizada. Contudo, apesar de um controlo adequado da PIO uma percentagem significativa de doentes continua a perder visão. Várias evidências têm demonstrado que a neuroinflamação tem um papel importante na patogénese do glaucoma. Em situações de neuroinflamação, as células da microglia ficam ativadas e libertam mediadores inflamatórios, os quais podem iniciar e perpetuar processos degenerativos e a morte das CGR. A enzima hidrolase de ácidos gordos com um grupo amida (do inglês fatty acid amide hydrolase, FAAH) é considerada o mediador primário da hidrólise dos endocanabinóides, tais como anandamida (AEA), oleoiletanolamina (OEA), e palmitoiletanolamina (PEA). O aumento da resposta aos endocanabinóides pode ser alcançado com a inibição da atividade da FAAH, bem como através da inibição do seu transportador. Foi descrito que o aumento local dos níveis de endocanabinóides, particularmente da AEA, pode complementar eficazmente estratégias neuroprotetoras para o tratamento de doenças degenerativas da retina, como o glaucoma. Além disso, tendo em conta as propriedades dos endocanabinóides como hipotensores oculares, e os seus efeitos neuroprotetores e anti-inflamatórios, os inibidores da FAAH têm potencial para reduzir a PIO e proteger as CGR, reforçando assim a sua relevância para o tratamento do glaucoma. Neste estudo, pretendeu-se avaliar o potencial efeito de um inibidor da FAAH (URB597) na diminuição da PIO num modelo de hipertensão ocular (cauterização das veias episclerais – CVE). Além disso, pretendeu-se investigar, pela primeira vez, os potenciais efeitos neuroprotetores e anti-inflamatórios do URB597 num modelo de pressão hidrostática elevada (PHE), com o objetivo de mimetizar uma situação de PIO elevada, em explantes de retina de rato. Em animais submetidos a CVE, a PIO aumentou significativamente, durante pelo menos 7 dias. A administração do URB597 diminuiu significativamente a PIO, e este efeito pareceu ter sido mediado pela ativação dos recetores dos endocanabinóides do tipo CB1. A atividade da FAAH foi fortemente inibida pelo URB597 em culturas organotípicas de retina. Além disso, o composto URB597 aumentou os níveis de AEA, Resumo viii OEA e PEA nestas culturas. A exposição de explantes de retina a PHE reduziu significativamente a sobrevivência das CGR. O tratamento com URB597 inibiu a diminuição do número de CGR. Contudo o efeito protetor do URB597 pareceu não ter sido mediado pela ativação dos recetores CB1. Além disso, o composto URB597 inibiu o aumento da imunoreatividade da isoforma indutível da sintase do monóxido de azoto (do inglês inducible nitric oxide synthase, iNOS) em células da microglia, induzida pela PHE em explantes de retina. No entanto, uma vez mais, o efeito inibitório do URB597 não pareceu ter sido mediado pelo recetor CB1. Em conclusão, os resultados apresentados nesta tese indicam claramente que a enzima FAAH representa um potencial alvo terapêutico num contexto de glaucoma, que vale a pena investigar, uma vez que a inibição da FAAH tem potencial para diminuir a PIO, para controlar a neuroinflamação e para proporcionar neuroprotecção contra a degenerescência das CGR.

Studying simple forms of learning, such as conditioned behaviors, is a useful approach to investigate the role of the plasticity mechanisms that underlie these processes. Classical conditioning of the eyelid is a form of associative learning that is based on the ability of mice to condition their eyelid responses to an initially neutral stimulus (Boele et al. 2010; Kandel et al. 2000). This behavior has been described to relay on an intact cerebellum (Chen et al. 1996; McCormick et al. 1981; McCormick & Thompson 1984), and its neural correlates have been studied extensively ever since. To date, some synapses within the cerebellar circuit have already been linked to specific features of the eyeblink conditioning (Carey & Lisberger 2002). Endocannabinoids - retrograde neuromodulators, that are present throughout the brain (El Manira & Kyriakatos 2010) – have recently been implicated in different forms of plasticity at the cerebellum, particularly type 1 endocannabinoid receptors (CB1R) (Carey et al. 2011). These receptors are also required for a normal performance of the cerebellumdependent eyeblink conditioning behavior (Kishimoto & Kano 2006). In the present research work, which was motivated by the findings described above, we tried to understand which features of the eyeblink conditioning – such as the percentage, amplitude, and timing of the conditioned response - were being modulated by CB1R signaling and in what way. Additionally we wanted to understand specifically in which cell types were these receptors exerting their effects in eyeblink conditioning. The results show that mice lacking CB1R’s, both globally and in granule cells, have an impaired performance in cerebellum dependent eyeblink conditioning, with greater effects observed in global CB1 KO mice. These impairments were observed both in terms of the percentage and amplitude of CR’s, but no differences were detected in terms of the timing of these responses, when in comparision to the control groups.

O desenvolvimento da placenta envolve processos de proliferação, diferenciação e apoptose das células placentárias denominadas trofoblastos. Os endocanabinóides (eCBs) são mediadores lipídicos endógenos que, tal como o THC (principal componente psicoativo da Cannabis sativa), são agonistas dos recetores canabinóides (CB1 e CB2). A anandamida (AEA) e o 2-araquidonilglicerol (2-AG) são os eCBs melhor caracterizados e juntamente com os recetores canabinóides e as enzimas de síntese e degradação dos eCBs constituem o sistema endocanabinóide. [...]