The global prevalence of substance use and its severe health, social, and economic consequences remain significant public health concerns. The continuous emergence of new psychoactive substances (NPS), alongside the widespread use of traditional drugs, exacerbates the challenges faced by forensic and clinical toxicologists. These substances often evade conventional detection methods due to their rapid evolution, posing significant risks to users and complicating monitoring efforts. Understanding substance use patterns and their impacts is essential for informing prevention strategies, shaping public policies, and implementing harm reduction initiatives. Hair analysis has emerged as a powerful tool in toxicological investigations, offering unique advantages over traditional biological matrices such as blood and urine. Its extended detection window enables the assessment of chronic and historical drug use, while its resistance to adulteration ensures reliability. As a non-invasive collection method, hair analysis facilitates large-scale studies, making it particularly suitable for exploring poly-drug use and evaluating the prevalence of both classical drugs and NPS across diverse populations. Quantitative hair analysis complements self-reported data, addressing discrepancies and enhancing the accuracy of substance use research. [...]

As piperazinas são consideradas um novo grupo de drogas de abuso sintéticas que surgiram no mercado ilícito a partir da segunda metade dos anos 90. Os seus efeitos psicoactivos, como por exemplo estados de euforia, são comparáveis aos obtidos por consumo de anfetaminas e ecstasy, sendo por isso consideradas uma alternativa legal, barata e segura. Deste modo torna-se necessário o desenvolvimento de métodos analíticos rápidos e sensíveis para a quantificação e determinação destas drogas em amostras biológicas. O objectivo deste trabalho foi o desenvolvimento e validação de um método analítico usando microextracção em seringa empacotada (MEPS) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de fotodiodos (UPLC-DAD), para a determinação e quantificação de quatro derivados das piperazinas em amostras de urina. As piperazinas estudadas foram a 1-benzilpiperazina (BZP), 1-(3-trifluorometilfenil)piperazina (TFMPP), 1-(3-clorofenil)piperazina (mCPP) e 1-(4-metoxifenilpiperazina (MeOPP), usando como padrão interno a 1-(2-clorofenil)piperazina (oCPP). É a primeira vez que este tipo de compostos é determinado em amostras de urina com recurso à MEPS. O método foi totalmente optimizado usando o planeamento factorial, uma poderosa ferramenta estatística que permite avaliar de forma multivariada os diversos factores intervenientes no processo de extracção. As condições finais optimizadas foram: diluição da amostra (1:2), número de aspirações pelo dispositivo (8), activação do mecanismo de troca iónica (1% ácido acético), a quantidade de metanol no solvente de lavagem (10%) e a eluição dos analitos (5% de amoníaco em metanol). O procedimento foi linear para o intervalo de concentrações de 0.1 (limite inferior de quantificação - LLOQ) até 5 μg/mL, com coeficientes de determinação (R2) superiores a 0.99 para todos os analitos. Os limites de detecção foram de 0.1 μg/mL para a BZP e TFMPP, enquanto para a MeOPP e mCPP foi obtido 0.05 μg/mL. Os valores da precisão intra-dia e intermédia variaram de 1 a 12% enquanto a exactidão está dentro de um intervalo de ±14% para todos os analitos, preenchendo os critérios normalmente aceites para a validação de métodos bioanalíticos. Nas condições optimizadas, obtiveram-se recuperações superiores a 80% para todos os analitos, excepto para a BZP (50%). A MEPS mostrou ser uma técnica simples e rápida para a determinação de piperazinas em amostras de urina, permitindo poupar tempo e dinheiro. Além disso, o facto de que apenas 0.1 mL de amostra são necessários para efectuar a análise, torna o método uma ferramenta poderosa e valiosa para a monitorização destas drogas em urina, por exemplo em situações de âmbito forense.

O presente relatório encontra-se dividido em três capítulos. As drogas de abuso e os efeitos negativos consequentes do seu consumo são um importante problema de saúde pública e fonte de preocupação. O início de consumo destas substâncias é cada vez mais precoce e a comunidade estudantil está particularmente vulnerável a esta prática. Assim, o primeiro capítulo refere-se à investigação desenvolvida no contexto da avaliação do consumo de drogas de abuso pela população estudantil da Universidade da Beira Interior. Neste âmbito, foi distribuído um inquérito aos alunos desta instituição, que abordava vários aspetos relacionados com o consumo de drogas de abuso. Dos resultados obtidos concluiu-se que os indivíduos do sexo masculino (59,7%) são os principais consumidores destas substâncias. Foi também possível afirmar que as drogas mais consumidas foram a cannabis, as substâncias adquiridas nas smartshops, cocaína e ainda as anfetaminas. De uma forma geral, os resultados demonstraram uma diminuição na continuidade de uso ao longo do tempo, com exceção da cannabis. Verificou-se também que mais de metade dos inquiridos iniciou o seu consumo antes de começar os seus estudos na universidade, para as drogas de abuso em geral, e que 24% declarou ter sofrido problemas de saúde consequentes do seu uso. Constatou-se que o local mais habitual de consumo é em casa, com companhia de amigos, e que o uso destas drogas ocorre com frequência juntamente com consumo de tabaco (66,8%). Por fim, cerca de 82% dos inquiridos afirmou acreditar na existência de um estigma social em relação aos consumidores de drogas de abuso e a maioria acredita estar suficientemente informado sobre estas substâncias. O segundo capítulo refere-se à experiência profissional desenvolvida no Instituti Fisioterapici Ospitalieri (IFO), em Roma (Itália), que decorreu no período de 5 de fevereiro a 7 de maio de 2014. Neste relatório estão descritas as atividades efetuadas, assim como os conhecimentos e competências adquiridas nos serviços farmacêuticos deste instituto. No terceiro e último capítulo, encontra-se descrita a experiência profissional adquirida na vertente da farmácia comunitária, realizada na Farmácia Gama (Viseu) de 9 de maio a 31 de julho. Este capítulo tem como objetivo abordar todas as atividades realizadas e competências adquiridas durante o estágio.

INTRODUCTION: Being a military police is stressful. The responsibility for providing security to society brings a health hazard, threats to his / her health and safety. The fear of not coming back home alive or even hurt can lead to anxiety and stress. The search for immediate relief increases the use of psychotropic drugs by the military police. Studies published until now that approached this theme showed methodological limitations. AIMS: To evaluate the use of psychotropic drugs of list B1 (Clonazepam, Bromazepam and Alprazolam) by military police of Goiás State, to identify the group age and gender that used it most, to quantify the time of military police service that they used the psychotropic and to evaluate the proportion of this use according to the military personnel (soldiers and officers). METHODS: A review article was written based on data published between 1990 and 2013 in PubMed and SciElo. Thereafter, and observational, descriptive and retrospective study was done. One hundred military police from Hospital of Military Police in Goiânia city were evaluated by collecting the data presented in medical prescriptions and corporate pharmacy database using a form specially designed for this. INCLUSION CRITERIA: All the controlled B1 prescriptions in 2011. EXCLUSION CRITERIA: Illegible prescriptions, other controlled prescriptions like C1 and patients that are dependent of military police. RESULTS: The frequency of use was divided according to: 1) Genre: men (68%), women (32%); 2) Age: 18 to 35 years old (4%); 36 to 50 years old (52%); 51 to 70 years old (12%); >71 years old (3%); uninformed (29%); 3) Psychotropics: Alprazolam (14%), Bromazepam (13%), Clobazam (1%), Clonazepam (53%), Cloxazolam (7%), Diazepam (1%), Flurazepam (1%), Midazolam (2%), Nitrazepam (7%);4) Trimester: Jan/Mar (22%), Apr/June (39%), July/Sept (31%), Oct/Dec (7%); 5) Service time:<5 years old (2%), 6 to 10 years old (5%), 11 to 20 years old (12%), 21 to 30 years old (48%); 6) Military rank: soldier (63%), officers (11%), pensionary (2%), uninformed (24%). CONCLUSION: The profile of the military police user of psychotropic drugs was female sex with an average age of 47. The most common psychotropic drug was Clonazepam. The service time when they most use the drugs was the one comprehended between 21 and 30 years of activity in the military force. From the Military Police personnel, there was no difference in relation to military officers.

Ionization is a crucial step in mass spectrometry (MS) and governs the versatility of this important analytical technique. Ionization is responsible for transferring atoms and molecules, in their respective ionized forms, into the high vacuum environment of mass spectrometers, where they are discriminated as a function of their m/z ratio. Among the several techniques of ionization of MS, the technique of ionization by Paper spray (PS) is one of the simplest, versatile and can be implemented easily in MS system. In this work, several PS-MS applications in the forensic area were developed, demonstrating their ability to screen new synthetic drugs as a complementary tool to the thin layer chromatography (TLC) method and as a tool to monitor Date-rape Drugs in blood. In the first application, PS-MS was shown to be an effective and rapid method for the identification of synthetic drugs lysergic acid diethylamide (LSD), 2,5-dimethoxy-4-chloroamphetamine (DOC), 2,5-dimethoxy-4-bromoamphetamine (DOB), 25C-NBOMe, 25B-NBOMe and 25I-NBOMe) in bottles, both by the isotopic profile of the substances and by the fragmentation presented in tandem mass spectrometry. In the second application, the TLC was coupled to the PS-MS in order to achieve greater reliability in the CCD results. In this way, a CCD method for the analysis of cocaine and adulterants (caffeine, benzocaine, lidocaine and phenacetin) was optimized by evaluating its sensitivity and selectivity. In order to improve the Detection and Quantification Limits for cocaine and adulterants, the spots were analyzed by PS-MS, obtaining improvements in the. Finally, in order to solve the low PS-MS selectivity, a new substrate was developed, especially when the analytical target is in complex mixtures, such as blood. It is a membrane coated with a molecularly printed polymer (MIP) with dual function: simultaneous extraction and ionization of targets in the same device. The developed membrane was applied in the determination of benzodiazepines in blood samples from alleged date rape- drugs victims. Blood is a complex sample containing several compounds that can suppress the analyte signal. With this modification, any suppression is avoided, obtaining excellent results, both qualitative and quantitative. In conclusion, PS-MS is a fast and low-cost technique that can replace or complement conventional analyzes in a laboratory of expertise, increasing the productivity of Brazilian justice.

The Harm Reduction Unit (HRU) of the Municipal Health Department of Santo André (state of São Paulo) is a working tool for healthcare that has the purpose of transforming the health situation of individuals who are part of socially stigmatized, therefore vulnerable, groups. These are individuals who spend their lives or work on the streets: drug users, male prostitutes, female sex workers, men who have sex with men, sexually exploited adolescents, transsexuals, transvestites, lesbians and women working in brothels. The HRU's potential benefits were indicated to be: it improved healthcare and condom use; decreased drug use; improved seeking and access to healthcare services; decreased material sharing for drug use; improved decision-making capacity. HRU's actions have gone beyond prevention of health damage, as it has promoted broader transformations such as awareness of social rights in general and health rights in particular, along with actions towards making these rights apply, based on the principle of integrality of SUS (Brazil's National Health System). Since 2002 we have assisted, through outreach work, 240 prostitutes, 120 travestites, 10 sexually exploited adolescents and 28 drug users (intravenous and crack).

O consumo de drogas de abuso tem vindo a aumentar ao longo dos anos, sendo assim um grave problema de saúde pública e estabilidade social. Face a este problema, o presente estudo tem como objetivo a deteção e confirmação das drogas de abuso, anfetamina, metanfetamina, morfina e benzoilecgonina (metabolito da cocaína), em amostras de fluido oral e soro provenientes de kits da OraSure Technologies, Inc. Estas amostras apresentavam, prazos de validade situados entre os anos, de 2021 e 2024 e foram armazenadas, à temperatura de 2-8ºC. Foi objetivo de estudo avaliar a estabilidade destas amostras, no que diz respeito a estas drogas de abuso.As substâncias foram extraídas através da técnica de precipitação proteica com acetonitrilo gelado e quimicamente derivatizadas por aquecimento induzido por microondas durante 90s (soluções de MBTFA para a anfetamina e metanfetamina e de MSTFA com 5% de TMCS para a morfina e benzoilecgonina). A identificação das substâncias foi realizada com um cromatógrafo de gases 7890B equipado com uma coluna cromatográfica HP-5MS (5% de fenilmetilpolisiloxano, 30m x 0,32mm; 0,25µm d.i.) e acoplado a um espetrómetro de massa de quadrupolo simples com uma fonte de impacto eletrónico de alta eficiência 5977A (GC-MS-EI, Agilent Technologies). Inicialmente, os cromatogramas foram adquiridos em modo full SCAN e após a análise dos padrões de fragmentação de cada substância foi usado o modo SIM (selected ion monitoring).Foi possível confirmar a presença de anfetamina, metanfetamina, benzoilecgonina e morfina, de acordo com os critérios de aceitação da World Anti-Doping Agency (WADA) nas amostras de fluido oral e soro. Nas amostras de fluido oral, os resultados obtidos indicam que não há degradação de qualquer das drogas investigadas durante o período de armazenamento estudado. Os resultados do estudo preliminar realizado em soro apontam para o mesmo tipo de comportamento para a anfetamina, metanfetamina e morfina.

O trabalho apresentado nesta dissertação teve como objectivo o estudo do mecanismo de biotransformação oxidativa de drogas de abuso e o desenvolvimento de metodologias electroanalíticas para a sua quantificação em formulações farmacêuticas e amostras apreendidas. As drogas estudadas foram a morfina, a codeína, a di-hidrocodeína, a heroína, a apomorfina e a cocaína. Para esclarecer e comprovar as etapas intermediárias e os produtos resultantes do processo oxidativo foram também sintetizados e estudados diversos metabolitos e análogos de cada uma das drogas referidas. Os estudos realizados permitiram clarificar os mecanismos de oxidação das drogas de abusoassim como propor novas etapas de oxidação e metabolitos paraos processos oxidativos que ocorrem. Os dados obtidos evidenciaram a ocorrência de uma interacção em solução entre a morfina e a cocaína com a formação de um complkexo de inclusão. Foram desenvolvidos dois métodos electroanalíticos baseados na voltametria de onda quadrada e na análise por injecção em fluxo com detecção amperométrica para a quantificação das drogas estudadas em formulações farmacêuticas e em amostras apreendidas. Estas metodologias analíticas mostraram serem boas alternativas à utilização dos métodos de referência baseados em análises volumétricas e na cromatografia líquida (HPLC).

Drogas de abuso afetam a mitocôndria e a sua toxicidade mitocondrial pode ser responsável pelos processos de neurodegeneração. Compreender os mecanismos responsáveis pela toxicidade mitocondrial pode possibilitar o desenvolvimento de estratégias para impedir a neurodegeneração e permitir a previsão do potencial tóxico de novos compostos. Neste trabalho, o nosso objetivo foi identificar marcadores que precedem a neurotoxicidade caracterizada pela perda de viabilidade celular e perceber como é que a mitocôndria intervém na toxicidade celular induzida por drogas de abuso. A primeira tarefa baseou-se na caracterização da ordem cronológica de eventos que precedem a morte celular neuronal desencadeada por drogas de abuso clássicas pertencentes a diferentes classes, incluindo Cocaína, metanfetamina (METH) e Metadona. A segunda tarefa envolveu a aplicação do conhecimento obtido com as drogas clássicas para caracterizar a neurotoxicidade de Mescalina (MESC) e de drogas de desenho como 2,5-dimetoxi-4-bromo-anfetamina (DOB) e 3,4-Metilenodioxianfetamina (MDA).Células SH-SY5Y foram diferenciadas de modo a obter-se um fenótipo neuronal. As células foram expostas a diferentes concentrações das drogas clássicas e os seus efeitos foram analisados após diferentes tempos de exposição, medindo o conteúdo de espécies reativas de oxigénio (ERO) (0-12h), viabilidade celular (ATP (24h), atividade metabólica e massa celular (24-72h)), ativação das caspases 3 e 7 (24h) e perda da integridade da membrana celular (usando Hoechst 33342/Iodeto de Propídeo) (72 e 96h). A polarização mitocondrial e a extensão da rede mitocondrial polarizada foram analisadas usando MitoTracker™ Red CMXRos (24h). O número de cópias do DNA mitocondrial também foi determinado. A significância estatística foi estabelecida para valores de P<0,05. Durante a primeira hora de incubação não houve alterações significativas no conteúdo de EROs no caso da Cocaína e METH; no entanto, para Metadona (0,0391mM) foi observada uma diminuição clara. Após 6h de incubação com 5,00mM de Cocaína, os níveis de EROs parecem ter atingido um plateau. Para o mesmo período, as concentrações de 2,50 e 5,00mM de Cocaína provocaram um aumento significativo no conteúdo de EROs. A exposição a METH e Metadona durante 12h pareceu aumentar ligeiramente os níveis de EROs, mas, curiosamente, não para as concentrações mais altas.Após 24h de exposição, a polarização mitocondrial foi distintamente afetada pelas diferentes drogas de abuso, tendo diminuído para as concentrações mais altas de Cocaína (2,50 e 10,0mM) e aumentado para as concentrações mais altas de METH (0,313 a 2,50mM). A polarização mitocondrial aumentou significativamente para concentrações mais baixas de Metadona (0,0391 e 0,0781mM) e diminuiu ligeiramente para concentrações mais altas (0,156 e 0,313mM). A extensão da rede mitocondrial polarizada diminuiu significativamente para as concentrações mais elevadas de todos os compostos testados (5,00 e 10,0mM de Cocaína, 2,50mM de METH, 0,156 e 0,0313mM de Metadona). Além disso, após 24h, observou-se uma ativação das caspases 3/7 para as concentrações de 2,50 mM de Cocaína, 1,25mM METH e 0,156mM de Metadona. As drogas de abuso (às concentrações testadas) não induziram alterações significativas no número de cópias do mtDNA.Todas as drogas de abuso induziram uma diminuição dependente da dose na viabilidade celular às 24, 48 e 72h de exposição, em comparação com o controlo. O cálculo dos IC50s, com 24, 48 e 72h de exposição, mostrou que a Metadona apresentou o perfil mais tóxico, seguida pela METH e, por fim, a Cocaína. As drogas de abuso testadas também induziram perda da integridade membranar celular em concentrações mais altas (5.00mM de Cocaína, 1.25 e 2.50mM METH e 0.0781 e 0.156mM Metadona) após 72h, e também para as concentrações de 2.50mM METH e 0.156, 0.313mM Metadona, após 96h.De seguida, avaliou-se a viabilidade celular após exposição a DOB, MDA e MESC de forma a compreender se os mecanismos subjacentes à toxicidade dos derivados são comparáveis aos observados para as drogas clássicas. Resultados preliminares indicaram que DOB foi o composto mais tóxico, e que MDA e MESC parecem induzir efeitos semelhantes. A DOB, à concentração de 0.200mM, também aumentou significativamente a ativação das caspases 3/7, após 24h.Já que DOB e MDA, são derivados da estrutura da anfetamina e similares à MESC, os dados podem contribuir para o estabelecimento de uma relação de estrutura-toxicidade entre compostos clássicos e drogas de desenho, com foco na função mitocondrial. Alterações na estrutura química das drogas clássicas, como a anfetamina, parecem afetar diferentemente a toxicidade associada a cada composto derivado. Em conclusão, os resultados sugerem que a disfunção mitocondrial precoce pode ser um marcador sensível e confiável que precede alterações na viabilidade celular, sendo um evento preditor da neurotoxicidade de drogas que pode ser útil para caracterizar novos compostos.

As drogas de abuso são substâncias químicas que produzem efeitos prejudiciais à saúde e, por serem nocivas para os consumidores, são controladas em todo o mundo. O consumo destas substâncias está presente no quotidiano do Homem desde os tempos primórdios, fazendo parte da cultura, da religião e das relações humanas e está quase sempre associado à procura de alterações do grau de consciência e do estado emocional e/ou físico. O consumo de drogas de abuso tem atingido dimensões significativas, maioritariamente na Europa e na população jovem, sendo uma preocupação para as autoridades e um perigo para a saúde pública a nível mundial. Dada a diversidade de drogas de abuso existentes no mundo e a rápida evolução destas no mercado ilícito, os laboratórios de toxicologia forense têm demonstrado dificuldade em acompanhar esse crescimento. O SQTF-C analisa essencialmente cinco grupos de drogas de abuso ilícitas destacando-se os opiáceos, cocaína e metabolitos, anfetaminas e derivados, canabinóides e novas substâncias psicoativas (catinonas sintéticas e feniletilaminas). Em toxicologia forense, as análises definidas para a deteção e quantificação de drogas de abuso são realizadas no sangue, sendo esta a matriz biológica preferencial. Porém, quando necessário são utilizadas outras matrizes biológicas (fluidos e órgãos), para detetar e confirmar a presença de drogas de abuso, alternativas ou auxiliares ao sangue, com o intuito de fornecer informações relevantes ou de orientar a análise toxicológica, nomeadamente a urina, o humor vítreo, o líquido pericárdico, o fígado, o rim, a bílis, o estômago e seu conteúdo, a saliva, o cabelo, entre muitas outras.O presente estágio consistiu na observação e no acompanhamento de todos os procedimentos realizados nas amostras biológicas e não biológicas no SQTF-C do INMLCF, I.P., desde a receção, armazenamento e conservação das amostras, bem como também na aplicação dos procedimentos de ensaio validados e acreditados de confirmação e de quantificação dos diferentes grupos de drogas de abuso. Durante o estágio foi possível observar a preparação da amostra através da técnica de extração em fase sólida (SPE) e a aplicação da cromatografia de gases acoplada à espetrometria de massa (GC-MS), como técnica analítica de rotina do SQTF-C do INMLCF, I.P. para a deteção e quantificação dos respetivos grupos de drogas de abuso em sangue. Com o presente estágio foram adquiridos e desenvolvidos conhecimentos que permitiram o seu relacionamento com os adquiridos durante toda a formação académica.