Aliarcobacter butzleri has commonly been associated with diseases in both humans and animals and is therefore classified as a moderate hazard to human health. This bacterium may be found in various environments on a large scale, such as soils, waters and the food chain, being a major source of transmission and contamination. Moreover, it has been associated with diarrheal and non-diarrheal gastrointestinal diseases, whose main symptoms include abdominal pain, nausea and fever. Despite the research available on this microorganism, its response to host’s resistance colonization mechanisms remain underexplored. Short-chain fatty acids (SCFA) have been taken into study as mechanisms of resistance to colonization and are produced through the microbial fermentation of non-digestible carbohydrates in the intestine, being responsible for the maintenance of intestinal and metabolic health in humans. As SFCA are one of the multiple adverse conditions A. butzleri faces until it reaches its preferred colonization site, the intestine, this work aims to evaluate the effects of SCFA on the virulence and survival of this bacterium. Therefore, the bacterium’s growth, gene expression, motility, biofilm formation and adhesion and invasion abilities were evaluated with different types and concentrations of SCFA. The majority of the assays were conducted with eight A. butzleri isolates and, in general, lower concentrations showed no significant effect on bacterial growth, whereas the higher concentrations revealed an increase of the lag phase and/or growth inhibition, in a strain-dependent manner. Regarding the evaluation of putative virulence genes expression, it was observed an overexpression by most concentrations tested for the flaA and luxS genes. At a concentration of 130mM_SCFA, the ciaB gene also displayed an overexpression. The motility of most strains used in the study presented a decrease in this virulence factor. Also, the results of the biofilm formation of this bacterium showed a strain-dependence considering the concentration used. Furthermore, the SCFA tested appeared to affect the bacterium’s ability to adhere and invade the Caco-2 cell line, showing a trend to reduce these virulence features. Altogether, through the analysis of the results obtained from this study, it is noticeable that SCFA present a modulatory effect on A. butzleri’ survival and virulence, in a straindependent form. Regardless, it is possible to conclude that SCFA have an important role during the infection process, with the modulation of A. butzleri’ virulence being a point for further investigation.

Um laboratório clínico é uma instalação que tem como principais objetivos a recolha e tratamento de amostras biológicas dos utentes, de modo que possam ser feitas determinações analíticas fiáveis e válidas em tempo útil, de maneira a poder ser estabelecido um diagnóstico clínico para que, posteriormente, caso seja necessário, se possa indicar uma terapia adequada ao diagnóstico do utente. O Laboratório de Patologia Clínica (LPC) da Unidade Local de Saúde da Cova da Beira é constituído por várias secções de diagnóstico, pelo que o presente relatório retrata a passagem pelas secções de Imunoquímica, Microbiologia e Hematologia, tendo sido desenvolvido um projeto de investigação na secção de Microbiologia. Nas últimas décadas, o aumento do número de infeções por microrganismos multirresistentes levou a Organização Mundial de Saúde (OMS) a classificar a resistência aos antibióticos como a principal ameaça do século XXI contra a saúde pública. Estas bactérias multirresistentes são responsáveis por provocar infeções associadas aos cuidados de saúde (IACS), estando associadas a prognósticos desfavoráveis. Estas bactérias possuem a capacidade de formar biofilmes, sendo a canalização hospitalar um dos locais onde estes se podem formar. Este facto levou a que os lavatórios fossem identificados como potenciais fontes de transmissão de microrganismos multirresistentes causadores de infeções aos doentes hospitalizados localizados a menos de 1 metro de distância. Neste sentido, o objetivo deste projeto de investigação foi avaliar, durante um período de 4 semanas, a presença de três microrganismos multirresistentes na canalização de 24 lavatórios, distribuídos por três serviços do Hospital Pêro da Covilhã, tendo sido testada em simultâneo a eficácia de dois desinfetantes na eliminação dos biofilmes. Os microrganismos estudados foram o Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA), a Klebsiella pneumoniae produtora de carbapenemases (KPC) e o Acinetobacter baumannii, enquanto os desinfetantes comparados foram o Klorkleen Plus (Imporquímica®) e o Granulado Desinfetante Efervescente (Agadesinfect®). A recolha de dados teve início no dia 22 de janeiro de 2024 tendo terminado a 15 de abril, durante esse período foram recolhidas 190 amostras a partir das quais foram gerados 570 resultados. Dos resultados obtidos 48 (8,4 %) foram positivos para os microrganismos em estudo, sendo 25 (4,4 %) positivos para MRSA e 23 (4,0 %) positivos para KPC. Relativamente ao Acinetobacter baumannii, não foi registado qualquer caso positivo em nenhum dos lavatórios estudados. Com base nos dados do crescimento destes microrganismos ao longo das semanas de estudo, foi possível avaliar qual o desinfetante mais eficaz na eliminação do biofilme, sendo que dos dois desinfetantes o Granulado Desinfetante Efervescente foi aquele que apresentou melhor eficácia na eliminação dos biofilmes. Com base no número de IACS em 2023 no Hospital Pêro da Covilhã e tendo em conta os dados da eficácia do referido Granulado na eliminação do biofilme, justifica-se a necessidade de criação de um protocolo de desinfeção periódica dos lavatórios com este desinfetante com o objetivo de controlar e diminuir o número de IACS provocadas por estes microrganismos multirresistentes nesta unidade hospitalar.

Food safety is a pressing global concern with widespread implications. Contamination of food products is linked to the transmission of over 200 diseases. The World Health Organization (WHO) estimates that 1 in 10 people worldwide falls ill each year from consuming contaminated food. Among the foodborne bacteria, Listeria monocytogenes is a significant pathogen known for its impact on public health and economies. Listeria monocytogenes is commonly found in unpasteurized dairy products and ready-to-eat foods, posing a global food safety concern and potentially causing severe health consequences. Listeria monocytogenes causes listeriosis in humans and animals, a disease with a high rate of hospitalization and mortality. Listeria monocytogenes is challenging to control due to its virulence traits and ability to adapt to antibiotics and adverse conditions encountered during food processing. Researchers are studying alternative methods to reduce the presence of pathogens, with bacteriophages, bacteriocins, and natural compounds, like essential oils being explored. Nonetheless, isolated natural compounds offer a consistent approach compared to essential oils, which can vary in composition. This study investigated the effects of four natural compounds (resveratrol, pcoumaric acid, camphor, and linalool) on inhibiting the virulence factors of Listeria monocytogenes. Sub-inhibitory concentrations of these compounds were examined for their impact on motility, quorum sensing, biofilm formation, toxin production, tolerance to adverse conditions, and antibiotic minimum inhibitory concentration (MIC). Camphor only inhibited motility, while p-coumaric acid reduced the bacterium’ hemolytic activity and increased susceptibility to low temperatures without NaCl. Resveratrol inhibited quorum sensing and biofilm formation and enhanced the impact of low temperatures and high osmolarity. Linalool emerged as the most promising compound, inhibiting all tested virulence traits, and potentiating the impact of stress conditions on bacterial survival. These findings highlight the potential of natural compounds in inhibiting Listeria monocytogenes virulence factors and their applicability as preservatives in the food industry.

As plantas são usadas na medicina popular desde cedo e constituem uma fonte de centenas a milhares de compostos com potencial terapêutico. Numa época em que os microrganismos estão constantemente a desenvolver mecanismos de resistência aos agentes antimicrobianos, torna-se fundamental a pesquisa por novos agentes antimicrobianos. Todas as estratégias devem ser exploradas e os produtos naturais constituem uma fonte de agentes terapêuticos inovadores que vêm de encontro a esta necessidade. A urze e o feto comum estão descritos na literatura como sendo utilizados na medicina tradicional no tratamento de feridas e como antisséticos, revelando-se assim candidatos interessantes para a pesquisa de agentes antimicrobianos. Assim, o objetivo global da presente dissertação passou pela caraterização fitoquímica dos extratos da urze e do feto comum, bem como pela avaliação da sua capacidade antioxidante e propriedades antimicrobianas. Desta forma, as plantas foram sujeitas a extração metanólica, e a partir do extrato bruto obtido foi realizado o fracionamento por passagem sucessiva de solventes de polaridade crescente, originando quatro frações. Os extratos brutos foram caraterizados fitoquimicamente, nomeadamente quanto ao seu conteúdo em fenóis totais e em flavonóides totais, pelos métodos colorimétricos de Folin-Ciocalteu e do cloreto de alumínio, respetivamente. De seguida, os extratos brutos foram avaliados quanto à sua atividade antioxidante por dois métodos diferentes: método do DPPH e método do sistema ß-caroteno/ácido linoleico. Os extratos e as respetivas frações foram sujeitos a cromatografia em camada fina (TLC), em que os cromatogramas obtidos foram revelados com reagente de Folin-Ciocalteu e com reagente de DPPH. No que toca à avaliação da atividade antimicrobiana, primeiro realizou-se o ensaio de difusão em disco, seguido da avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) dos extratos e respetivas frações e foi realizada ainda a bioautografia destes. Perante a atividade antimicrobiana verificada pelos ensaios de difusão em disco e pela avaliação da CMI, procedeu-se à avaliação do modo de ação do extrato bruto e respetivas frações com maior atividade antimicrobiana, por ensaio de curvas de morte em L. monocytogenes, e foi testado o efeito destes extratos na formação de biofilmes e na tolerância a condições de stress (pH ácido e temperaturas elevadas) desta bactéria. Os resultados evidenciam um alto teor em fenóis e em flavonóides totais, com as flores da urze apresentando o maior conteúdo fenólico, e a urze e as suas flores o maior conteúdo em flavonóides totais. Relativamente à atividade antioxidante, a urze e as suas flores apresentaram uma atividade antioxidante forte, e o feto comum moderada, pelo método do DPPH. Pelo método do sistema ß-caroteno/ácido linoleico, o feto comum revelou a maior atividade antioxidante. Quanto à avaliação da atividade antimicrobiana, os extratos da urze e das suas flores mostraram o maior potencial antimicrobiano, nomeadamente contra bactérias gram positivas e contra leveduras, e os extratos do feto comum contra leveduras. O ensaio de curvas de morte revelou que os quatro extratos testados (fração 4 da urze, extrato bruto e frações 2 e 4 das flores da urze) reduzem o crescimento de L. monocytogenes, e que todos os extratos de forma geral inibem significativamente a formação de biofilmes da mesma bactéria. O estudo da influência destes mesmos extratos na tolerância de L. monocytogenes a condições adversas revelou que todos eles aumentam a suscetibilidade em condições ácidas, sendo que, no que toca a temperaturas elevadas, o efeito não é tão notório. Em conclusão, todos os extratos apresentam alto conteúdo em compostos fenólicos e flavonóides, e apresentam potencial antioxidante. O feto comum apesar de não ter demonstrado atividade antibacteriana revelou atividade antifúngica. A urze e as suas flores apresentam atividade antimicrobiana contra bactérias gram positivas e contra leveduras, sendo de destacar a atividade evidenciada pelas flores da urze. O estudo mais aprofundado dos extratos com maior atividade antimicrobiana indicou um potencial uso da fração 4 da urze e do extrato bruto e frações 2 e 4 das flores da urze contra L. monocytogenes. Assim, pode-se concluir que a urze e o feto comum podem ser uma fonte de novos compostos com potencial antimicrobiano.

Since its discovery in 1991, the Aliarcobacter genus comprises 11 recognized species, including Aliarcobacter butzleri. This species has been described as a pathogen, being the fourth Campylobacter-related microorganism most commonly found in human diarrheic samples. Infections by this bacterium are often associated with abdominal cramps, nausea and watery diarrhoea. Although some studies described its pathogenic potential, still not much is known about its virulence mechanisms, which can complicate the treatment of infections caused by this microorganism and its control. In this manner, this work aimed to evaluate the different virulence phenotypic profiles of fifteen human isolates of A. butzleri. Initially, all isolates were typed by Multilocus Sequence Typing, which showed that all isolates belonged to different sequence types, pointing towards the genetic diversity of this bacterium. Next, several assays were performed to characterize the virulence phenotypic profile of each clinical isolate by assessing: (i) the antimicrobial profile through determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of six antibiotics of distinct classes; (ii) the susceptibility to reactive oxygen and nitrogen species; (iii) survival in acidic conditions (pH 4); (iv) the presence of the urease enzyme; (v) the resistance to bile salts; (vi) the chemotactic profile of each strain; (vii) the motility; (viii) differences in morphotype; (ix) biofilm formation ability; (x) haemolytic activity; (xi) survival in human serum; and (xii) the interaction between A. butzleri with the human colorectal adenocarcinoma cell line, Caco-2. Although, the clinical A. butzleri isolates under study, showed similar oxidative and nitrosative stress responses and morphotype, it was observed a great phenotypic variety among the isolates. Various isolates showed a multidrug resistance profile, with higher resistance frequency being observed for the antibiotics: ertapenem (100%), tetracycline (93.3%), and ampicillin (86.6%). Considering the potential survival of the isolates through the gastrointestinal system, the isolates demonstrated diverse resistance profiles against acidic conditions, with six strains having a positive phenotype for the presence of the urease enzyme, but all demonstrated to be resistant do the bile salts concentrations found in the human gut. Distinct chemotactic profiles indicating a possible interaction with compound of the human mucosa were observed. The isolates under study demonstrated low motility or a diverse profile of higher motility, and different profiles of biofilm formation classified from weak to strong biofilm formers. The A. butzleri isolates showed weak haemolytic activity and low survival in the human serum, with exception of one. Only seven strains demonstrated to be capable of invading Caco-2 cells, while all showed to be adherent to the cell line despite at different levels. The effect of aerobic conditions in the phenotype has also been studied on three isolates presenting distinct phenotypic profiles (INSA Cu 29393, INSA 3202 e INSA 3711). To evaluate the differences in the phenotypic profile when subjected to different atmospheric conditions (aerobiosis and microaerophilia), a similar characterization to the one done for assessment of the phenotypic profile of the clinical isolates was performed. Overall, the aerobic conditions seemed to have a positive effect in the haemolytic activity and motility of the isolates, although having no impact on the flagellin A expression. Further, the aerobic conditions also negatively affected the oxidative stress resistance of the isolates, with the remaining assays showing a strainspecific response. In conclusion, taking into account the results obtained, we can acknowledge that a great phenotypic variability can be found among the clinical isolates of A. butzleri studied, which may be associated with a different host-bacterium interaction.

O gênero Streptococcus é alvo de constante reclassificações dentre suas espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar as características apresentadas por 24 amostras de Streptococcus pseudoporcinus, sendo 19 de origem humana, incluindo uma derivada da amostra tipo, e cinco de origem animal (isoladas de leite), em comparação com amostras de referência de Streptococcus porcinus. Estas amostras foram caracterizadas por testes fisiológicos, perfil total de proteínas por SDS-PAGE, susceptibilidade a antimicrobianos e atributos relacionados a virulência. Além disso, a técnica de MALDI-TOF foi utilizada na caracterização das amostras, aliado a análise filogenética e genômica comparativa in silico. Também foi analisado o perfil proteômico utilizando espectrometria de massa (ESI-Q-TOF). Dos testes fisiológicos utilizados, a hidrólise do hipurato foi o único capaz de diferenciar as espécies. Na metodologia de MALDI-TOF, os resultados obtidos revelaram valores de escores distintos dependendo do tipo do protocolo empregado. Extratos proteicos obtidos pelo tratamento com ácido fórmico e acetonitrila, demonstraram resultados eficazes. A partir dos espectros obtidos, foi determinada uma similaridade entre as amostras do estudo. Houve uma perfeita discriminação entre as amostras S. pseudoporcinus das de S. porcinus. Adicionalmente, as amostras de S. pseudoporcinus obtidas de leite mostraram uma maior correlação entre si. Os dados obtidos com a metodologia de MALDI-TOF foram também avaliados quanto à identificação de biomarcadores, demonstrando a presença de picos intra e inter-específicos. A análise dos perfis proteicos obtidos por SDS-PAGE revelou uma grande similaridade entre as espécies, não tendo sido suficientemente discriminatória. A análise pelo pareamento das sequências do gene rrs, disponibilizadas em bancos de dados públicos, revelou que as amostras de S. pseudoporcinus de fonte humana estão menos relacionadas com as amostras de fonte animal. Os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos demonstraram 66,0% de amostras de S. pseudoporcinus de origem humana resistentes à tetraciclina. Todas as amostras se mostraram capazes de formar biofilmes, sendo que a suplementação do meio de cultura com sacarose ou glicose aumenta consideravelmente a quantidade de biomassa aderida. As amostras tipo de ambas as espécies, quando cultivadas sob a forma de biofilmes apresentaram valores de concentração inibitória até 40.000 vezes maiores que células planctônicas. Diversas proteínas relacionadas a virulência foram identificadas pelas análises proteômica e genômica. Ambas as espécies foram capazes de aderir a células humanas. A genômica comparativa mostrou uma similaridade muito maior entre amostras de origem animal do que com amostras de origem humana de S. pseudoporcinus, tanto pelas sequências gênicas quanto pelas análises de predição de proteínas.

Objetive: Evaluate the antibacterial effect of reciprocating systems associated with sodium hypochlorite 2.5% and apple vinegar in infected root canals. Methods: Fifty human anterior teeth uniradicular were prepared, inoculated with E. faecalis and examined after sixty days. The teeth were randomly assigned to five groups: (1. WaveOne® 40.08; 2. Reciproc® 40.06; 3. Unicorne® 40.06; 4 and 5 positive and negative controls. For each experimental group (n = 10), five specimens were irrigated with sodium hypochlorite 2.5%, and five with apple vinegar. Bacterial growth was analyzed using turbidity of culture medium followed by UV spectrophotometry. The cleaning of dentinal walls was analyzed by scanning electronic microscopy (SEM). Results: All groups showed a significant reduction of the optimal density of the culture medium after the root canal preparation (p<0,05). No sanitizing strategy promoted the complete elimination of E. faecalis. In the analysis of cleaning the root surface, it was found that in none of the groups showed complete removal of debris, not being verified significant differences indifferent to analyzed thirds (p> 0.05). Conclusion: The reciprocating instruments (WaveOne®, Reciproc® and Unicorne®) and irrigating sodium hypochlorite solution 2.5% and apple cider vinegar have not been effective in eliminating E. faecalis complete in infected root canals.

INTRODUCTION: Healthcare facility surfaces have been widely recognized as reservoirs of relevant microorganisms in the context of healthcare associated infections. Surfaces most frequently touched/handled by healthcare workers (HCW), such as clipboards used to hold patient records, are pointed as the most frequently contaminated, mainly due to the low adherence of these professionals to hand hygiene. AIM: To evaluate the microbiological conditions of clipboards used in clinical and surgical intensive care units (ICU). MATERIALS AND METHODS: This is a descriptive, cross-sectional study, conducted in October 2018, in a large teaching hospital (246 active beds) in the Midwest region. Eight acrylic clipboards, four from each ICU, were collected using aseptic technique. Two 1.5cmX1.5cm fragments were extracted from the upper, where the clip is located, and from the right hand side of the clipboards, which were previously defined as the most touched by HCW through non-participant observation in the investigated units. One upper and one right hand side fragment of each clipboard, totaling 16 samples, were randomly selected and subjected to bacteriological culture. One upper or right hand side fragment of each clipboard, totaling eight samples, were selected for analysis by Scanning Electron Microscopy (SEM). RESULTS: Bacterial growth was observed in the upper and/or right hand side area of all clipboards (n = 8). A total of 32 bacteria were isolated, and most of them were isolated from the upper area (n = 19). Most of the isolated bacteria belonged to the Staphylococcus (n = 15) and Bacillus (n = 7) genera. Pathogenic bacteria, such as Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Enterococcus faecium, and multidrug resistant bacteria, including oxacillin-resistant S. epidermidis and the MLSb group, were isolated from clipboards from both ICUs. Structure suggestive of biofilm or singly adhered cell, presence of soil and/or structural damage were detected in all clipboards analyzed by SEM. Biofilms were detected on two clipboards, one from each ICU. CONCLUSION: Contamination by pathogenic and potentially pathogenic bacteria, including multidrug-resistant, and the presence of soil, structural damage, and biofilm were detected on clipboards intended to hold records of patients classified as at high risk for infection. These results indicate the need for cleaning/disinfection protocols for these surfaces, as well as educational measures aimed to improve hand hygiene adherence by the multiprofessional team.

Enterococcus faecium se destaca como uma espécie bacteriana frequentemente multirresistente aos antimicrobianos, associada à infecções hospitalares em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi investigar comparativamente as características de duas amostras de E. faecium: SS-1274 (derivada da amostra tipo da espécie) e CL-6729 (amostra clínica proveniente de infecção urinária de origem hospitalar). Estas amostras foram caracterizadas quanto à susceptibilidade aos antimicrobianos, presença de determinantes genéticos de resistência e de virulência e métodos de tipagem molecular PFGE, MLVA e MLST. Foi também avaliada a capacidade de formação de biofilmes e as características associadas a sua arquitetura, por microscopia confocal a laser (CLSM). A resposta de macrófagos da linhagem J.774 às células planctônicas e aos biofilmes foi identificada por quantificação das citocinas TNF-α, IFN-γ, IL-6 e IL-10 (através de ensaio imunoenzimático), dosagem de óxido nítrico e CLSM. Avaliações por ESI-Q-TOF foram empregadas para determinação do perfil proteômico de biofilmes e do crescimento planctônico, a partir de resultados prévios obtidos por SDS-PAGE. Foi também realizado o sequenciamento do genoma completo (WGS) da amostra clínica CL-6729 com auxílio da plataforma Illumina Hiseq e anotação dos genes pela PATRIC 3.2.75.Nossos resultados demonstraram que CL-6729 é multirresistente e alberga os genes vanAe esp; é pertencente ao MT-12 e ao ST-78, consequentemente faz parte do complexo clonal 17 (CC17). Esta amostra apresentou resistência constitutiva à vancomicina. Análises da integridade do Tn1546 revelaram a presença de IS19 inserida no gene vanS. Pela reunião de dados obtidos por qPCR e sequenciamento parcial dos genes envolvidos, a presença de IS19 parece estar influenciando direta ou indiretamente na alteração da expressão da resistência. A expressão constitutiva da resistência à vancomicina foi detectada tanto para o cultivo planctônico como em biofilmes. Biofilmes de E. faecium apresentaram biomassa rica em proteína após 24 h de incubação e em DNA após 72 h. Dados relativos à interação por 24 h de CL-6729 macrófagos J.774 demonstraram uma modulação negativa da produção de nitrito pelos macrófagos. Por outro lado, em relação ao estímulo à produção de citocinas, os dados sugerem uma indução na produção das citocinas, TNF-α, IFN-, IL-6 e IL-10, tanto por biofilmes quanto células planctônicas de ambas as amostras bacterianas. Além disso, CLSM revelou que macrófagos são capazes de penetrar na estrutura dos biofilmes. Os resultados relativos à espectrometria de massa sugerem que células de biofilmes de E. faeciumparecem estar ativas, diante da identificação de um considerável número de proteínas relacionadas ao metabolismo e divisão celular. Análises por WGS revelaram um tamanho de 2,9 Mb, com 3.125 genes preditos, dentre os quais cerca de 2.000 genes estão associados ao metabolismo de carboidratos e de ácidos núcleicos e à divisão celular. Foram anotados genes associados à resistência aos antimicrobianos, virulência, sequências de inserção, fagos e plasmídeos. Nossos dados apontam para um processo evolutivo dinâmico e especializado, que indica alterações significativas entre amostras de uma mesma espécie. Tais alterações demonstram capacitar esta espécie, anteriormente identificada como patógeno de baixo potencial de virulência, ao status de um microrganismo capaz de atingir gravemente a saúde humana. Consideramos que nossos resultados agregam informações que reafirmam a necessidade do acompanhamento contínuo das infecções causadas por microrganismos desta espécie, diante de suas habilidades de adaptação e persistência.

Este estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade dos biofilmes de E. faecalis a NaOCl, CHX e PAA após uma exposição de ácido cítrico 2,5%. O biofilme de E. faecalis foi formado em lamínulas de vidro circular de 13 mm Ø em placas de cultura de 24 poços. Os biofilmes foram tratados ou não durante 5 minutos com ácido cítrico, posteriormente, exposto a diferentes concentrações de NaOCl, CHX e PAA. A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de unidade formadora de colônias (UFCs). Ao analisar o percentual de redução bacteriana na forma planctônica em função do tempo e da solução/concentração, o teste de Anova demonstrou não haver diferença estatística entre CHX e NaOCl (p>0,05). Contudo a CHX, quando utilizada sozinha, apresentou menor efetividade que NaOCl (p<0,05) sobre o biofilme. O pré-tratamento do biofilme com ácido cítrico tornou as bactérias na forma séssil mais sensível ao NaOCl e ao PAA. Baseado nos resultados obtidos foi possível concluir que o tratamento com ácido cítrico aumentou a sensibilidade do biofilme de E. faecalis a irrigante utilizado em procedimento endodôntico e orienta o início do tratamento com irrigação prévia com o ácido cítrico.