A restrição calórica (RC) pode atrasar ou prevenir doenças relacionadas à idade em diferentes espécies, variando de leveduras a primatas. Embora a aplicação deste regime em humanos permaneça incerta, a proporção de benefícios da RC poderia acrescentar mais anos saudáveis para a vida média do que até mesmo uma cura para o câncer ou doenças cardíacas. Em função de que poucas pessoas estariam dispostas a manter um estilo de vida sob RC, a busca por substâncias que possam imitar os seus efeitos benéficos a saúde e a longevidade, apresenta-se com importância na atualidade. O uso da cianobactéria Spirulina platensis tem mostrado capacidade de aumentar o tempo de vida de modelos como leveduras e roedores visto suas propriedades funcionais, afora os benefícios para a saúde do homem. Para tal, 30 ratos Wistar, adultos foram submetidos aos tratamentos: controle (C), restrição calórica (RC) e Spirulina platensis (Sp). O presente trabalho objetivou verificar o potencial mimetizador da microalga Spirulina platensis nos efeitos benéficos da restrição calórica. Para o tratamento Spirulina platensis a ração padrão para ratos foi acrescida de 1,5 g de Spirulina platensis/Kg de ração; para o grupo restrição calórica fez-se a diminuição de 30 % da dieta comparados ao grupo controle. Os parâmetros analisados foram: massa corporal, glicemia, TBARS e perfil lipídico, através das medidas de colesterol total, HDL, LDL e TGA. Os resultados obtidos revelam que a massa corporal do grupo RC se manteve, porém nos grupos C e Sp aumentaram significativamente (p<0,001). Os níveis de TGA se mantiveram nos grupos RC e Sp e aumentaram no grupo C (p=0,0039). O colesterol HDL não demonstrou diferença significativa (p>0,05). Os valores de LDL aumentaram no grupo C (p= 0,0075) e nos grupos RC e Sp se mantiveram. O colesterol total diminuiu de forma significativa apenas no grupo RC (p<0,05). Os índices de TBARS diminuíram significativamente nos grupos RC e Sp(p<0,001) comparados ao grupo controle. Os níveis de glicose não sofrem alterações na comparação pré e pós-tratamentos para os diferentes grupos. Os resultados dos efeitos benéficos nos níveis de TGA, colesterol LDL, lipoperoxidaçao lipídica (TBARS) e manutenção do peso pelo uso da Spirulina platensis no processo de envelhecimento de ratos, neste estudo, indica que esta cianobactéria pode ser utilizada como um funcional mimetizador da restrição calórica

Após 13 anos de debate parlamentar, o governo federal instituiu em 8 de outubro de 2008 uma nova ordem jurídico-administrativa através da Lei n.11.794 que foi regulamentada em 15 de julho de 2009 com o Decreto 6.899. A nova legislação introduziu modelos de condutas que antes não existiam, criou o Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA) e tornou obrigatória a implantação de Comissões de Ética no Uso de Animais (CEUAs) pelas instituições que criam ou utilizam animais para ensino e pesquisa. Partindo do pressuposto de que a Lei n. 11794/2008 é uma política pública regulatória de ciência, tecnologia e inovação em saúde (CT&I/S), o objetivo deste trabalho é demonstrar que a implementação da política regulatória em uma instituição pública federal de pesquisa em saúde é um processo atravessado por relações transnacionais, pelas interpretações que os atores da pesquisa fazem da Lei com base em suas práticas de trabalho, e pelas ações institucionais de tradução local de outras políticas governamentais. O estudo contempla dois níveis de descrição e análise complementares: o da formulação e o da implementação da política regulatória na Fiocruz. O primeiro descreve e analisa o processo de tramitação do Projeto de Lei que originou a Lei e sua regulamentação pelo CONCEA, até dezembro de 2011. O segundo é um estudo de caso inspirado pela abordagem interpretativa, centrado na tradução da Lei pelos pesquisadores, especialistas e gestores da Fiocruz em relação às suas práticas de trabalho. A tese formulada resulta do seguinte percurso metodológico: leitura do movimento de tradução dos interesses dos atores envolvidos no jogo parlamentar do Congresso Nacional de formulação, discussão e aprovação da Lei; delineamento do espaço institucional em que as interpretações dos pesquisadores estão embebidas e que as políticas de CT&I/S são implementadas; leitura das ações e dos programas em CT&I/S do MS para a Fiocruz entre 2004 e 2010; um ano de observação participante nas reuniões da Comissão de Ética no Uso de Animais da Fiocruz; entrevistas semi-estruturadas com 22 pesquisadores, gestores e especialistas em animais de laboratório para compreender o enquadramento da Lei pelos atores nas suas práticas de trabalho. Concluimos afirmando que a aproximação entre a pesquisa pré-clinica e clínica é uma estratégia de contorno às restrições vivenciadas pelos pesquisadores nos processos de trabalho com animais de pesquisa que se desenvolve no cenário da pesquisa translacional e transnacional. O modelo animal é um dispositivo que divide as comunidades instrumentais de pesquisadores biomédicos entre os que utilizam e os que não utilizam animais. A governança da pesquisa biomédica com animais de laboratório não está estabilizada no espaço institucional: as diferentes comunidades instrumentais de usuários de animais, produtores de animais, gestores e membros da CEUA estão em disputa.

Four wild strains of T. cruzi were studied for this paper: M226 isolated from Calomys callosus (Rodentia) and R52, R64, and R65 from Didelphis albiventris (Marsupialia). The animals were captured in the county of Formosa in the State of Goias. trypanosome strains were studied in 40 Swiss mice and in laboratory stock of C. callosus. The following aspects were focused: parasitemia, prepatent period, lethality, and histopathologic reactions. Results indicated that these strains have low virulence for inoculated animals. Parasitemia was always low and regular for C. callosus. In mice, however, parasites were seen only in a few instances in the peripheral blood. The prepatent periods were 9.2 to 10.2 days for C. callosus and 12 to 48 days for mice. Lethality was 7.7% for C. callosus and 12% for mice. The parasites were found in the tissues of the inoculated animals in the proportions of 17.2% for C. callosus and 25% for mice. Tissue reaction in both rodent species showed that all the T. cruzi strains had strong affinity for skeletal or cardiac muscle.

A doença renal crónica é um grave problema de saúde pública com elevada prevalência e mortalidade. Estima-se que esta doença afete aproximadamente 8-16% da população. Durante a progressão da doença renal crónica o número de nefrónios vai diminuindo e são gradualmente substituídos pela acumulação de matriz extracelular, que consequentemente leva a glomeruloesclerose e a fibrose tubulointersticial. Neste sentido, tem sido referido que a proteína H-Ras está associada ao desenvolvimento de fibrose renal, como também ao aumento do stresse oxidativo. O modelo de redução de 5/6 da massa renal em ratos é frequentemente usado para estudar os mecanismos na progressão da doença renal crónica, nomeadamente a fibrose renal. Neste modelo, a redução da massa renal é obtida por nefrectomia direita, seguida pela remoção de dois terços do rim esquerdo, com uma redução de massa renal superior a 85%. Sabe-se que neste modelo, após a redução da massa renal, os animais desenvolvem hipertrofia glomerular, atrofia tubular, inflamação, stresse oxidativo e fibrose renal. Foram objetivos desta tese de doutoramento avaliar os efeitos do tratamento crónico com o ácido catomélico A (ACA), um inibidor específico da ativação da proteína H-Ras, nas alterações induzidas pela redução de 5/6 da massa renal em ratos machos Wistar (Rattus norvegicus), particularmente na função renal, stresse oxidativo e fibrose renal; caracterizar as alterações renais associadas com redução da massa renal por ultrassonografia e avaliar a correlação dos parâmetros ultrassonográficos com os resultados bioquímicos e histológicos. Neste protocolo experimental foram utilizados 60 ratos machos Wistar, dos quais 7 morreram após a cirurgia. Uma semana após a cirurgia, os restantes 53 foram divididos em quatro grupos experimentais: ratos em que foi simulada a cirurgia (SO) (n=13), SO+ACA (n=13), ratos que sofreram redução de 5/6 da massa renal (RMR) (n=14) e RMR+ACA (n=13). Aos animais dos grupos SO+ACA e RMR+ACA, uma semana após a cirurgia, foi administrado intraperitonealmente ACA (0.23 μg/kg) três vezes por semana durante seis meses consecutivos. Uma vez por mês foram recolhidas amostras de urina de 24 horas e de sangue para posterior avaliação da função renal. No 3º e 6º mês, após a cirurgia, foi avaliado em cada animal o tamanho e a ecogenicidade do rim esquerdo por ultrassonografia utilizando o modo bidimensional US (modo B). No 6º mês, após a cirurgia, foi também avaliada a fibrose renal através deste método ultrassonográfico. Ao longo do estudo morreram 2 animais do grupo RMR e 5 do grupo RMR+ACA. No final do estudo os restantes animais foram anestesiados com uma overdose de isoflurano seguida da eutanásia por exsanguinação e submetidos a necrópsia. Posteriormente, os rins esquerdos foram removidos e processados para avaliação da fibrose renal e análise de stresse oxidativo. De acordo com os nossos resultados, o grupo RMR apresentou ecogenicidade cortical e medular significativamente (p<0,05) maior quando comparado com o grupo SO; e ecogenicidade medular significativamente (p<0,05) maior quando comparado com o grupo RMR+ACA. No 3º mês após a cirurgia, observou-se uma correlação estatisticamente significativa (p<0,05) entre a creatinina plasmática e o comprimento renal. Os animais do grupo RMR+ACA apresentaram um menor grau de lesões renais (glomeruloesclerose, fibrose intersticial, inflamação intersticial, arteriosclerose e dilatação tubular). É importante salientar que a glomeruloesclerose e a arteriosclerose foram significativamente (p<0,001) menores no grupo de RMR+ACA quando comparado com o grupo RMR. Os nossos resultados, obtidos utilizando a ultrasonografia, estavam de acordo com os obtidos através das análises histopatológicas. A redução de massa renal foi acompanhada por uma redução significativa (p<0,05) da atividade da catalase e da glutationa redutase, aumento dos níveis de peroxidação lipídica e redução do rácio glutationa reduzida/glutationa oxidada. A administração de ACA aumentou significativamente (p<0,05) a atividade da catalase e da glutationa redutase, reduziu os níveis de peroxidação lipídica e aumentou o rácio glutationa reduzida/glutationa oxidada, contudo não foram obtidas diferenças significativas para a peroxidação lipídica e rácio glutationa reduzida/glutationa oxidada. Embora não tenham sido encontradas diferenças significativas entre os grupos de RMR em qualquer dos parâmetros da função renal avaliados (densidade urinária, fluxo urinário, proteinúria, creatinina na urina; azoto ureico, creatinina, fósforo e potássio plasmáticos; depuração da creatinina) a administração de ACA melhorou ligeiramente estes parâmetros. A administração de ACA durante um período de seis meses atenuou o stresse oxidativo e impediu a progressão da fibrose renal no modelo de redução de 5/6 da massa renal. Estes resultados demonstram a necessidade de realizar outros estudos in vivo com o ACA para avaliar a sua ação terapêutica noutras doses e determinar a toxicidade do ACA, no sentido de explorar a sua segurança como potencial terapêutica futura no tratamento da doença renal crónica.

O consumo de metanfetamina (META) conduz a deficits cognitivos e alterações de humor, incluindo sintomas depressivos. A administração de uma única dose elevada de META em roedores reproduz a disfunção monoaminérgica observada em dependentes de META.. Contudo, ainda não se sabe se um regime neurotóxico de META é capaz de induzir um comportamento depressivo em murganhos. Neste trabalho, propomo-nos avaliar o comportamento depressivo em murganhos após uma única dose elevada de META. Murganhos adultos C57BL/6 (3-4 meses de idade) foram injetados com META (30 mg/kg, i.p.) e o seu comportamento depressivo foi avaliado até aos 49 dias após a administração pelo teste da suspensão pela cauda (TST). As alterações comportamentais relacionadas com o estriado, incluindo a função motora e a memória de procedimento, foram também avaliadas pelos testes do poste vertical (PT) e do labirinto aquático de Morris (MWM, versão da plataforma visível), respetivamente. As alterações na homeostasia das monoaminas no córtex frontal e no estriado, assim como os níveis de proteína glial fibrilar ácida (GFAP), foram avaliados através de HPLC-ED e western-blotting. Todos os valores foram expressos pela média ± SEM e a análise estatística foi realizada com recurso ao teste t-student ou à ANOVA seguida de um teste de comparação múltipla de Newman-Keuls. Esta dose única e elevada de META provocou uma hipertermia aguda com pico à 1h após a sua injeção. A META aumentou significativamente o tempo de imobilidade no TST aos 3, 8 e 49 dias após o tratamento com este psicoestimulante. Por outro lado, não foram observadas alterações na função motora no PT, 3 e 8 dias após a injecção com META. Além disso, a META não prejudicou a aprendizagem nem a memória de procedimento durante os quatro dias de teste na versão da plataforma visível do MWM (1-4 dias após adminstração com META). A velocidade de natação também não foi alterada nos murganhos injectados com META, reforçando a ausência de deficits motores. Relativamente aos parâmetros neuroquímicos, foi observada uma depleção acentuada de dopamina (30%) e de tirosina hidroxilase (40%) no córtex frontal e no estriado dos murganhos injetados com META, aos 3 e 49 dias após a sua administração. A META também induziu uma depleção de 5-HT no cortex frontal aos 3 dias após a injecção, que persistiu até aos 49 dias. Adicionalmente, a intensa astrogliose observada aos 3 dias vem confirmar que estamos na presença de um modelo neurotóxico. Os nossos resultados evidenciam, pela primeira vez, que uma administração aguda de META induz um comportamento depressivo a longo prazo em murganhos acompanhado por persistentes alterações monoaminérgicas. Este modelo experimental de comportamento depressivo a longo prazo é relevante para desvendar o substrato neurobiológico subjacente aos sintomas depressivos observados nos dependentes de META.

Introdução: A diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), uma doença metabólica que resulta de insulino-resistência (IR) e incapacidade da célula  segregar adequadamente insulina, representa um dos mais importantes desafios para a saúde pública do mundo ocidental. A IR é um estado metabólico anormal precoce e tem várias causas ainda pouco conhecidas. É aceite a ligação entre IR, inflamação e obesidade, no entanto, nem todos os doentes com DMT2 são obesos, ainda que, nestes doentes, a ativação crónica do sistema imunitário esteja, também, presente e relacionada com IR. A restrição calórica (RC), uma intervenção dietética baixa em calorias, sem malnutrição, é útil na prevenção e controle da DMT2. No entanto, não são, ainda, compreendidos os efeitos da RC na DMT2 não obesa. Objetivo: Avaliar, na DMT2 e de forma independente da obesidade, ratos Goto-Kakizaki (GK) idosos, os efeitos da RC na IR hepática e na inflamação local. Métodos: Foram estudados quatro grupos experimentais de ratos com 12 meses de idade. Dois grupos controlo, alimentados ad libitum: ratos Wistar normais (W) e GK – um modelo de DMT2 espontânea, não obesa; e dois grupos submetidos a restrição calórica durante 12 semanas (WRC e GKRC). Foi feita avaliação metabólica sistémica, sendo a análise de vários parâmetros (JNK, Akt/PKB e AMPK) no tecido hepático realizada por Western Blot. Resultados: A RC conduziu a aumento da tolerância à glicose e diminuição dos níveis de HbA1C, triglicerídeos e ácidos gordos livres. A RC também se mostrou benéfica em parâmetros envolvidos na inflamação e IR hepáticos: diminuição da expressão de JNK e aumento da expressão de Akt e de AMPK. Conclusão: A RC melhora o perfil glicídico e lipídico da DMT2. Os seus efeitos em parâmetros de inflamação e energéticos/ de IR a nível hepático sugerem o envolvimento do fígado nos benefícios metabólicos da RC.

Na década de 80 o óxido nítrico (˙NO) foi identificado como o factor de relaxamento do endotélio (EDRF) e, desde então, tem havido um grande esforço no sentido de esclarecer a química, biologia e acções farmacológicas desta molécula. O ˙NO é um gás hidrofóbico de natureza radicalar e com curto tempo de vida, que se difunde rapidamente no meio celular. As características físico-químicas desta molécula permitem que seja considerado um mensageiro intercelular atípico, nomeadamente o facto de a informação que veicula estar associada à dinâmica de concentração no tempo e no espaço de um modo independente da interacção com receptores membranares específicos. O ˙NO é produzido por via enzimática pela enzima óxido nítrico sintase (NOS) cuja activação leva à conversão da L-arginina em óxido nítrico e L-citrulina e está envolvido numa miríade de processos fisiológicos que incluem, entre outros, a vasodilatação, o relaxamento muscular liso, a resposta imune, inibição da agregação plaquetar, estando também envolvido a nível cerebral em fenómenos de neurotransmissão e neurodegenerescência. Enquanto neuromodulador, o ˙NO possui propriedades muito especiais, uma vez que não é armazenado em vesículas e se difunde rapidamente através das células onde é produzido para as células vizinhas, actuando assim numa área localizada do sistema nervoso central. A nível neuronal, a produção de ˙NO ocorre via activação do receptor NMDA do glutamato, que inicia uma cascata de eventos intracelulares que modulam a plasticidade sináptica, o desenvolvimento, a aprendizagem e a memória de acordo com os modelos de potenciação e inibição de longo prazo. A activação excessiva destes receptores está na base do desenvolvimento de processos patológicos conducentes a fenómenos neurodegenerativos, como por exemplo a doença de Parkinson ou Alzheimer. Um dos principais problemas no estudo da actividade biológica do ˙NO é a determinação da sua concentração in vivo. A falta de dados quantitativos robustos levou à formulação simplista do dogma segundo o qual o ˙NO é uma toxina para elevadas concentrações e um modulador fisiológico para baixas concentrações. No entanto não se conhece com rigor a concentração de ˙NO nos tecidos e em particular no cérebro. Portanto, o desenvolvimento de metodologias analíticas para a medição do ˙NO in vivo é de uma grande relevância biológica e biomédica. A maioria das metodologias são indirectas, quantificando produtos de oxidação ou decomposição do ˙NO (e.g. espectrofotometria, colorimetria). As técnicas 4 Resumo electroquímicas permitem a medição directa em tempo real e com a utilização de microeléctrodos alia-se a resolução temporal a uma elevada resolução espacial. Este trabalho teve como objectivo principal o desenvolvimento e caracterização de microeléctrodos de fibra de carbono modificados quimicamente com Nafion® e orto-fenilenodiamina (o-PD). Depois da sua construção, procedeu-se a uma avaliação sistemática das suas características analíticas. Assim, o potencial de oxidação do ˙NO (+ 0,78 ± 0,02 V) foi determinado por voltametria de onda quadrada. Os microeléctrodos foram posteriormente calibrados por amperometria a + 0,9 V, obtendo-se um valor médio de sensibilidade de 954 ± 217 pA/μM ˙NO. Foram ainda caracterizados no que diz respeito ao limite de detecção (6 ± 2 nM ˙NO), tempo de resposta (t50% 1,9 ± 0,1 s) e selectividade contra potenciais interferentes com a sua detecção. Esta primeira parte do trabalho serviu de base para a realização de estudos posteriores que envolveram a medição em tempo real da dinâmica de produção e decaimento de ˙NO em fatias de hipocampo de rato. Neste âmbito, foram delineados três tipos de experiências: em primeiro lugar foi estimulada a produção de ˙NO através da activação do receptor NMDA do glutamato com diferentes estímulos, tendo sido calculada uma carga total média de 95 ± 8 nC, n=4 para os estímulos com 5 mM de L-glutamato e de 197 ± 38 nC, n=3 para os estíumulos com 10 μM de NMDA. De seguida, foi avaliada a intensidade da resposta em função da concentração de estímulo utilizada (800 ± 100 nM de DETA/NO para o estímulo de 10 μM de NMDA, 6,7 ± 2,0 μM de DETA/NO para o estímulo de 25 μM de NMDA e 13,0 ± 3,0 μM de DETA/NO para o estímulo de 50 μM de NMDA. O terceiro conjunto de experiências teve como objectivo a avaliação do perfil de resposta após estímulos consecutivos da mesma fatia de hipocampo (o primeiro estímulo produziu uma carga total de 41 nC enquanto que o segundo produziu uma carga total de 4,5 nC), ocorrendo um decaimento da intensidade do sinal de 80 ± 10% do primeiro para o segundo estímulo, em termos de carga total.

A diabetes mellitus tipo 2 é uma doença cuja incidência tem vindo a aumentar em todos os países desenvolvidos, de tal forma que é tida como uma verdadeira epidemia. É uma patologia crónica associada a graves morbilidades macro e microvasculares que incluem patologia retiniana, renal e neurosensitiva, e que resulta de alterações da célula β pancreática e insulinorresistência. A berberina é um alcalóide natural com propriedades anti-hiperglicémicas e no aumento da sensibilidade à insulina, tendo sido proposto, em diversos estudos, que a ativação da enzima AMPK fosse um dos seus principais mecanismos de ação. O objetivo deste trabalho consistiu em estudar os efeitos da berberina no fígado de ratos Goto-Kakizaki, um modelo animal de diabetes tipo 2 não obeso, e perceber melhor o mecanismo de ação deste composto. Criámos dois grupos de animais, um grupo controlo de ratos Wistar e Goto-Kakizaki e um grupo de ratos Wistar e Goto-Kakizaki tratados durante 3 meses com berberina. Avaliámos o peso corporal, diversos parâmetros metabólicos e os níveis de AMPK, IRS-1 e Akt no tecido hepático. Apesar da melhoria dos parâmetros metabólicos, não observámos ativação daquelas proteínas, no tecido hepático, após o tratamento com berberina. Sugere-se que possam existir outras vias moleculares que também contribuam para o efeito metabólico da berberina na diabetes.

A presente monografia pretende explorar a dificuldade de transposição da informação obtida durante a fase pré-clínica para os ensaios clínicos. Muitos estudos na fase pré-clínica apresentam resultados promissores. No entanto, por vezes, os ensaios clínicos não são bem-sucedidos. A que é que isto se deve? Porquê que a fase pré-clínica não consegue antever o fracasso que por vezes se verifica nos ensaios clínicos? O que é que pode ser feito futuramente para contrariar esta situação? Estas são algumas questões que precisam de ser discutidas para se poder evoluir no sentido da otimização dos modelos animais usados na investigação em oncologia, para que estes sejam capazes de mimetizar o melhor possível a doença humana. É fulcral a escolha adequada do modelo animal a utilizar na fase pré-clínica. Esta monografia incide nos modelos de murganho, uma vez que são os modelos animais mais utilizados em investigação. Este assunto adquire especial relevo, uma vez que a indústria farmacêutica perde milhões de euros em ensaios clínicos falhados. Se os modelos animais fossem mais preditivos, esta situação seria evitada e a indústria farmacêutica poderia investir no estudo de fármacos mais promissores.